CAJ | 학술논문

家蚕BmAWD与家蚕翅膀发育密切相关,控制其翅膀发育的完整性及可用性.在对本实验室构建的家蚕蛹期cDNA文库测序中,我们筛选到-条编码AWD蛋白的cDNA序列,将其命名为BmAWD基因.通过生物信息学分析,发现该基因序列全长为689 bp,ORF框为465bp,编码154个氨基酸残基,含有-个NDPK保守结构域.通过PCR扩增获得该基因ORF框并克隆到表达载体pGEX-5X-1上,得到重组表达质粒pGEX-5X-1-AWD,将该重组子转化大肠杆菌BL21,经PCR、酶切鉴定证明重组正确,在37℃下以IPTG诱导表达后收集菌体并裂解,SDS～PAGE分析发现在43 kD左右处有一特异性蛋白条带,与预期值相符,但目的蛋白主要以沉淀即包涵体形式存在,25℃下诱导表达,SDS-PAGE分析表明目的蛋白主要存在于上清中.采用亲和层析法纯化融合蛋白GST-AWD,目的蛋白通过与层析柱上的GST磁珠结合而被纯化分离.
가잠BmAWD여가잠시방발육밀절상관,공제기시방발육적완정성급가용성.재대본실험실구건적가잠용기cDNA문고측서중,아문사선도-조편마AWD단백적cDNA서렬,장기명명위BmAWD기인.통과생물신식학분석,발현해기인서렬전장위689 bp,ORF광위465bp,편마154개안기산잔기,함유-개NDPK보수결구역.통과PCR확증획득해기인ORF광병극륭도표체재체pGEX-5X-1상,득도중조표체질립pGEX-5X-1-AWD,장해중조자전화대장간균BL21,경PCR、매절감정증명중조정학,재37℃하이IPTG유도표체후수집균체병렬해,SDS～PAGE분석발현재43 kD좌우처유일특이성단백조대,여예기치상부,단목적단백주요이침정즉포함체형식존재,25℃하유도표체,SDS-PAGE분석표명목적단백주요존재우상청중.채용친화층석법순화융합단백GST-AWD,목적단백통과여층석주상적GST자주결합이피순화분리.