重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2010年
15期
1988-1990
,共3页
符跃强%蒋静%陈娟%陈聪%方芳%卢仲毅%许峰
符躍彊%蔣靜%陳娟%陳聰%方芳%盧仲毅%許峰
부약강%장정%진연%진총%방방%로중의%허봉
肺泡Ⅱ型上皮细胞%细胞培养%改良巴氏染色%板层小体
肺泡Ⅱ型上皮細胞%細胞培養%改良巴氏染色%闆層小體
폐포Ⅱ형상피세포%세포배양%개량파씨염색%판층소체
目的 建立成年大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ细胞)分离、纯化、原代培养和鉴定的技术方法,并观察其体外生长特性及SP-A表达情况.方法 将0.08%胰蛋白酶消化液从气管注入肺组织,消化分离ATⅡ细胞.将大鼠IgG包被的培养皿免疫吸附纯化后,进行原代培养.用倒置相差显微镜观察细胞生长情况,透射电镜(TEM )鉴定细胞,改良巴式染色法鉴定并计算细胞纯度,MTT法检测细胞增殖情况,Western blot检测细胞表达SP-A动态变化.结果 细胞产量约为2.2×107个/只大鼠.电镜下观察到ATⅡ细胞特征性结构--板层小体;纯度大于 90%.体外培养36～72 h时细胞生长良好,细胞质内有较多颗粒;96 h后细胞呈长索形,细胞内颗粒减少,并出现空泡.ATⅡ细胞表达SP-A在36 h左右达高峰,之后表达减弱.结论 利用0.08%胰蛋白酶消化分离和大鼠IgG免疫吸附纯化可获得满意的原代ATⅡ细胞.培养36～72 h时细胞增殖旺盛,生长良好,SP-A表达丰富,是进行体外实验的良好时期.
目的 建立成年大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞(ATⅡ細胞)分離、純化、原代培養和鑒定的技術方法,併觀察其體外生長特性及SP-A錶達情況.方法 將0.08%胰蛋白酶消化液從氣管註入肺組織,消化分離ATⅡ細胞.將大鼠IgG包被的培養皿免疫吸附純化後,進行原代培養.用倒置相差顯微鏡觀察細胞生長情況,透射電鏡(TEM )鑒定細胞,改良巴式染色法鑒定併計算細胞純度,MTT法檢測細胞增殖情況,Western blot檢測細胞錶達SP-A動態變化.結果 細胞產量約為2.2×107箇/隻大鼠.電鏡下觀察到ATⅡ細胞特徵性結構--闆層小體;純度大于 90%.體外培養36～72 h時細胞生長良好,細胞質內有較多顆粒;96 h後細胞呈長索形,細胞內顆粒減少,併齣現空泡.ATⅡ細胞錶達SP-A在36 h左右達高峰,之後錶達減弱.結論 利用0.08%胰蛋白酶消化分離和大鼠IgG免疫吸附純化可穫得滿意的原代ATⅡ細胞.培養36～72 h時細胞增殖旺盛,生長良好,SP-A錶達豐富,是進行體外實驗的良好時期.
목적 건립성년대서폐포Ⅱ형상피세포(ATⅡ세포)분리、순화、원대배양화감정적기술방법,병관찰기체외생장특성급SP-A표체정황.방법 장0.08%이단백매소화액종기관주입폐조직,소화분리ATⅡ세포.장대서IgG포피적배양명면역흡부순화후,진행원대배양.용도치상차현미경관찰세포생장정황,투사전경(TEM )감정세포,개량파식염색법감정병계산세포순도,MTT법검측세포증식정황,Western blot검측세포표체SP-A동태변화.결과 세포산량약위2.2×107개/지대서.전경하관찰도ATⅡ세포특정성결구--판층소체;순도대우 90%.체외배양36～72 h시세포생장량호,세포질내유교다과립;96 h후세포정장색형,세포내과립감소,병출현공포.ATⅡ세포표체SP-A재36 h좌우체고봉,지후표체감약.결론 이용0.08%이단백매소화분리화대서IgG면역흡부순화가획득만의적원대ATⅡ세포.배양36～72 h시세포증식왕성,생장량호,SP-A표체봉부,시진행체외실험적량호시기.
