山东农业科学
山東農業科學
산동농업과학
SHANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
6期
94-97
,共4页
贾峰%魏庆华%杜铮%王彩霞%黄晓书%刘卫群
賈峰%魏慶華%杜錚%王綵霞%黃曉書%劉衛群
가봉%위경화%두쟁%왕채하%황효서%류위군
反相高效液相色谱%烤烟烟叶%5-甲基胞嘧啶%胞嘧啶
反相高效液相色譜%烤煙煙葉%5-甲基胞嘧啶%胞嘧啶
반상고효액상색보%고연연협%5-갑기포밀정%포밀정
通过不同流动相、测定温度、流速的对比,优化了分离烟叶总DNA中胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的高效液相色谱法.烤烟烟叶DNA采用CTAB法提取,高氯酸水解,用KOH调节pH到3～5,取上清液测定.色谱柱为Nucleosil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm).优化后测定条件为:流动相采用甲醇∶5 mmol/L戊烷磺酸钠(10∶90,V/V),流速0.7 ml/min,柱温30℃,检测波长273 nm,进样量20 μl.该方法简化了流动相的配制,缩短了分离时间,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的加标回收率分别为103.50%和96.67%,相对标准偏差为2.35%和2.80%.用该方法研究烤烟烟叶发育过程中总DNA胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的含量,效果良好,符合烟叶生长发育规律.
通過不同流動相、測定溫度、流速的對比,優化瞭分離煙葉總DNA中胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的高效液相色譜法.烤煙煙葉DNA採用CTAB法提取,高氯痠水解,用KOH調節pH到3～5,取上清液測定.色譜柱為Nucleosil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm).優化後測定條件為:流動相採用甲醇∶5 mmol/L戊烷磺痠鈉(10∶90,V/V),流速0.7 ml/min,柱溫30℃,檢測波長273 nm,進樣量20 μl.該方法簡化瞭流動相的配製,縮短瞭分離時間,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的加標迴收率分彆為103.50%和96.67%,相對標準偏差為2.35%和2.80%.用該方法研究烤煙煙葉髮育過程中總DNA胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的含量,效果良好,符閤煙葉生長髮育規律.
통과불동류동상、측정온도、류속적대비,우화료분리연협총DNA중포밀정화5-갑기포밀정적고효액상색보법.고연연협DNA채용CTAB법제취,고록산수해,용KOH조절pH도3～5,취상청액측정.색보주위Nucleosil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm).우화후측정조건위:류동상채용갑순∶5 mmol/L무완광산납(10∶90,V/V),류속0.7 ml/min,주온30℃,검측파장273 nm,진양량20 μl.해방법간화료류동상적배제,축단료분리시간,포밀정화5-갑기포밀정적가표회수솔분별위103.50%화96.67%,상대표준편차위2.35%화2.80%.용해방법연구고연연협발육과정중총DNA포밀정화5-갑기포밀정적함량,효과량호,부합연협생장발육규률.
