中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2012年
3期
178-186
,共9页
乔峰%张健美%白银磊%杨信怡%李聪然%李国庆%胡辛欣%游雪甫
喬峰%張健美%白銀磊%楊信怡%李聰然%李國慶%鬍辛訢%遊雪甫
교봉%장건미%백은뢰%양신이%리총연%리국경%호신흔%유설보
分枝杆菌,结核%铁氧还蛋白NAPP还原酶%细胞色素P450酶系统%电子传递链复合蛋白质类
分枝桿菌,結覈%鐵氧還蛋白NAPP還原酶%細胞色素P450酶繫統%電子傳遞鏈複閤蛋白質類
분지간균,결핵%철양환단백NAPP환원매%세포색소P450매계통%전자전체련복합단백질류
目的 体外评价结核分枝杆菌(Mtb)铁氧还蛋白还原酶FdrA 和 FprA 的活性,探索它们分别与两种铁氧还蛋白的偶联作用,并分析它们在 CYP125A1 的电子传递链中的作用.方法 采用大肠杆菌作为宿主克隆结核分枝杆菌 FdrA、FprA 和 CYP125A1 编码基因并进行蛋白外源表达;以NADH 或 NADPH 为电子供体,2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)为电子受体评价 FdrA 及 FprA 的活性;应用细胞色素C 为电子受体研究 FdrA 或 FprA 与不同铁氧还蛋白的偶联作用;分析 CYP125A1 对 4-胆甾烯-3-酮的代谢作用进而研究 FdrA 和 FprA 在 CYP125A1 的电子传递链中的作用.结果 FdrA 对 NADH 亲和力较高,Fdx 对 FdrA 活性有明显提升作用,菠菜铁氧还蛋白(spFDX)对其活性没有提升作用,FdrA/Fdx 和 FdrA/spFDX 均不能支持 CYP125A1的活性.FprA 对 NAPDH 亲和力较高,Fdx 和 spFDX 均对 FprA 活性有明显提升作用,Fdx 尤甚,FprA/spFDX 可以支持 CYP125A1 的活性,FprA/Fdx 不能支持 CYP125A1的活性.结论 FprA 是结核分枝杆菌 CYP125A1 的电子传递链蛋白,FdrA 可能不是 CYP125A1 的电子传递链蛋白.
目的 體外評價結覈分枝桿菌(Mtb)鐵氧還蛋白還原酶FdrA 和 FprA 的活性,探索它們分彆與兩種鐵氧還蛋白的偶聯作用,併分析它們在 CYP125A1 的電子傳遞鏈中的作用.方法 採用大腸桿菌作為宿主剋隆結覈分枝桿菌 FdrA、FprA 和 CYP125A1 編碼基因併進行蛋白外源錶達;以NADH 或 NADPH 為電子供體,2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)為電子受體評價 FdrA 及 FprA 的活性;應用細胞色素C 為電子受體研究 FdrA 或 FprA 與不同鐵氧還蛋白的偶聯作用;分析 CYP125A1 對 4-膽甾烯-3-酮的代謝作用進而研究 FdrA 和 FprA 在 CYP125A1 的電子傳遞鏈中的作用.結果 FdrA 對 NADH 親和力較高,Fdx 對 FdrA 活性有明顯提升作用,菠菜鐵氧還蛋白(spFDX)對其活性沒有提升作用,FdrA/Fdx 和 FdrA/spFDX 均不能支持 CYP125A1的活性.FprA 對 NAPDH 親和力較高,Fdx 和 spFDX 均對 FprA 活性有明顯提升作用,Fdx 尤甚,FprA/spFDX 可以支持 CYP125A1 的活性,FprA/Fdx 不能支持 CYP125A1的活性.結論 FprA 是結覈分枝桿菌 CYP125A1 的電子傳遞鏈蛋白,FdrA 可能不是 CYP125A1 的電子傳遞鏈蛋白.
목적 체외평개결핵분지간균(Mtb)철양환단백환원매FdrA 화 FprA 적활성,탐색타문분별여량충철양환단백적우련작용,병분석타문재 CYP125A1 적전자전체련중적작용.방법 채용대장간균작위숙주극륭결핵분지간균 FdrA、FprA 화 CYP125A1 편마기인병진행단백외원표체;이NADH 혹 NADPH 위전자공체,2,6-이록분전분(DCPIP)위전자수체평개 FdrA 급 FprA 적활성;응용세포색소C 위전자수체연구 FdrA 혹 FprA 여불동철양환단백적우련작용;분석 CYP125A1 대 4-담치희-3-동적대사작용진이연구 FdrA 화 FprA 재 CYP125A1 적전자전체련중적작용.결과 FdrA 대 NADH 친화력교고,Fdx 대 FdrA 활성유명현제승작용,파채철양환단백(spFDX)대기활성몰유제승작용,FdrA/Fdx 화 FdrA/spFDX 균불능지지 CYP125A1적활성.FprA 대 NAPDH 친화력교고,Fdx 화 spFDX 균대 FprA 활성유명현제승작용,Fdx 우심,FprA/spFDX 가이지지 CYP125A1 적활성,FprA/Fdx 불능지지 CYP125A1적활성.결론 FprA 시결핵분지간균 CYP125A1 적전자전체련단백,FdrA 가능불시 CYP125A1 적전자전체련단백.
