二型谷氨酸羧肽酶口服基因疫苗的制备及其降低大鼠麻醉药用量的初步研究
이형곡안산최태매구복기인역묘적제비급기강저대서마취약용량적초보연구
Development of oral vaccine carrying GCPⅡ gene and its role in reducing the dosage of pentobarbital in rat:a primitive research
  • 万方数据
    中华医学杂志 중화의학잡지
    National Medical Journal of China
    2004年 14期 1152-1156 ,共5页

    田士强%王任直%李桂林%王欣%张波%姚勇%窦万臣%孔燕国%张振兴%栗世方

    전사강%왕임직%리계림%왕흔%장파%요용%두만신%공연국%장진흥%률세방

    沙门氏菌菌苗%戊巴比妥%二型谷氨酸羧肽酶 沙門氏菌菌苗%戊巴比妥%二型穀氨痠羧肽酶
    사문씨균균묘%무파비타%이형곡안산최태매
    目的研制携带二型谷氨酸羧肽酶(GCP Ⅱ)的口服疫苗,探讨该疫苗对大鼠麻醉药用量的影响.方法采用聚合酶链反应、酶切连接和蓝白筛选的方法,构建GCP Ⅱ的表达载体;用磷酸钙共沉淀的方法转染HEK293细胞,G418筛选阳性细胞克隆;逆转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞染色的方法鉴定阳性细胞株;氯化钙法制备携带GCP Ⅱ表达载体的减毒鼠伤寒沙门氏菌口服疫苗(SL-GCP Ⅱ);采用原代培养的巨噬细胞吞噬SL-GCP Ⅱ的方法,观察疫苗的体外表达情况;将50只雄性SD大鼠随机分为A、B 2组,每组25只,2组鼠的体重分别为(174 g±13 g)和(172 g±11 g),差异无显著意义(P=0.072).A组胃内灌注600 μL、OD2600.6 SL-GCP Ⅱ,两周内4次给药;B组为对照组,给予SL3261,剂量和方法与A组相同.采用免疫荧光的方法检测大鼠循环中GCP Ⅱ抗体滴度,观察麻醉药戊巴比妥钠的用量.结果扩增GCP Ⅱ基因并构建了含有GCP Ⅱ基因的表达载体--pCDNA3.1-GCP Ⅱ;建立了细胞株 HEK 293-GCPⅡ;体外实验证明培养的巨噬细胞吞噬SL-GCP Ⅱ后,能够有效表达GCP Ⅱ基因.体内实验发现口服疫苗能够激活22/25只SD大鼠产生GCP Ⅱ抗体,实验组麻醉药戊巴比妥钠的用量(36.9 mg/kg±1.6 mg/kg)显著低于对照组(40.8 mg/kg±1.4 mg/kg,P=0.00).结论成功研制了GCP Ⅱ的口服疫苗,它能够激活大鼠免疫反应,产生GCP Ⅱ抗体,并降低了大鼠麻醉药的用量.这种现象可能与疫苗能够减少脑内兴奋性氨基酸的生成有关.
    목적연제휴대이형곡안산최태매(GCP Ⅱ)적구복역묘,탐토해역묘대대서마취약용량적영향.방법채용취합매련반응、매절련접화람백사선적방법,구건GCP Ⅱ적표체재체;용린산개공침정적방법전염HEK293세포,G418사선양성세포극륭;역전록취합매련반응화면역형광세포염색적방법감정양성세포주;록화개법제비휴대GCP Ⅱ표체재체적감독서상한사문씨균구복역묘(SL-GCP Ⅱ);채용원대배양적거서세포탄서SL-GCP Ⅱ적방법,관찰역묘적체외표체정황;장50지웅성SD대서수궤분위A、B 2조,매조25지,2조서적체중분별위(174 g±13 g)화(172 g±11 g),차이무현저의의(P=0.072).A조위내관주600 μL、OD2600.6 SL-GCP Ⅱ,량주내4차급약;B조위대조조,급여SL3261,제량화방법여A조상동.채용면역형광적방법검측대서순배중GCP Ⅱ항체적도,관찰마취약무파비타납적용량.결과확증GCP Ⅱ기인병구건료함유GCP Ⅱ기인적표체재체--pCDNA3.1-GCP Ⅱ;건립료세포주 HEK 293-GCPⅡ;체외실험증명배양적거서세포탄서SL-GCP Ⅱ후,능구유효표체GCP Ⅱ기인.체내실험발현구복역묘능구격활22/25지SD대서산생GCP Ⅱ항체,실험조마취약무파비타납적용량(36.9 mg/kg±1.6 mg/kg)현저저우대조조(40.8 mg/kg±1.4 mg/kg,P=0.00).결론성공연제료GCP Ⅱ적구복역묘,타능구격활대서면역반응,산생GCP Ⅱ항체,병강저료대서마취약적용량.저충현상가능여역묘능구감소뇌내흥강성안기산적생성유관.
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