实验生物学报
實驗生物學報
실험생물학보
ACTA BIOLOGIAE EXPERIMENTLIS SINICA
2003年
2期
105-112
,共8页
孙兆贵%孔维华%颜山%顾正%左嘉客
孫兆貴%孔維華%顏山%顧正%左嘉客
손조귀%공유화%안산%고정%좌가객
泛素羧基末端水解酶%酶动力学参数%卵母细胞成熟
汎素羧基末耑水解酶%酶動力學參數%卵母細胞成熟
범소최기말단수해매%매동역학삼수%란모세포성숙
本实验室已报道中华大蟾蜍卵母细胞的p28蛋白具泛素羧基末端水解酶活性,称作tUCH,它和哺乳类中发现的UCH L1的氨基酸序列具高度同源性,二级结构同源性比较发现,二者可能具类似的功能.本文实验表明:未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞的可溶性蛋白中均含有tUCH,约占提取物中蛋白质总量的2%.根据测定所得到的GST-tUCH和GST-UCH L1对底物Ub-AMC的酶动力学参数,说明卵母细胞中tUCH可能与小鼠UCH L1有类似的生物学功能;anti-tUCH单抗可以与原核细胞表达的tUCH和显性失活突变类型tUCH C(90)S特异结合,但不识别小鼠的UCH L1.Anti-tUCH单抗能够和tUCH结合但不能封闭它的UCH活性.当anti-tUCH单抗注入卵母细胞内,则孕酮诱导的生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)过程受到抑制,足见tUCH参与GVBD调节并不依赖其UCH活性.
本實驗室已報道中華大蟾蜍卵母細胞的p28蛋白具汎素羧基末耑水解酶活性,稱作tUCH,它和哺乳類中髮現的UCH L1的氨基痠序列具高度同源性,二級結構同源性比較髮現,二者可能具類似的功能.本文實驗錶明:未成熟卵母細胞和成熟卵母細胞的可溶性蛋白中均含有tUCH,約佔提取物中蛋白質總量的2%.根據測定所得到的GST-tUCH和GST-UCH L1對底物Ub-AMC的酶動力學參數,說明卵母細胞中tUCH可能與小鼠UCH L1有類似的生物學功能;anti-tUCH單抗可以與原覈細胞錶達的tUCH和顯性失活突變類型tUCH C(90)S特異結閤,但不識彆小鼠的UCH L1.Anti-tUCH單抗能夠和tUCH結閤但不能封閉它的UCH活性.噹anti-tUCH單抗註入卵母細胞內,則孕酮誘導的生髮泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)過程受到抑製,足見tUCH參與GVBD調節併不依賴其UCH活性.
본실험실이보도중화대섬서란모세포적p28단백구범소최기말단수해매활성,칭작tUCH,타화포유류중발현적UCH L1적안기산서렬구고도동원성,이급결구동원성비교발현,이자가능구유사적공능.본문실험표명:미성숙란모세포화성숙란모세포적가용성단백중균함유tUCH,약점제취물중단백질총량적2%.근거측정소득도적GST-tUCH화GST-UCH L1대저물Ub-AMC적매동역학삼수,설명란모세포중tUCH가능여소서UCH L1유유사적생물학공능;anti-tUCH단항가이여원핵세포표체적tUCH화현성실활돌변류형tUCH C(90)S특이결합,단불식별소서적UCH L1.Anti-tUCH단항능구화tUCH결합단불능봉폐타적UCH활성.당anti-tUCH단항주입란모세포내,칙잉동유도적생발포파렬(germinal vesicle breakdown,GVBD)과정수도억제,족견tUCH삼여GVBD조절병불의뢰기UCH활성.
