第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2005年
17期
1725-1728
,共4页
24p3/SIP24%稳定转染%小鼠NIH3T3细胞
24p3/SIP24%穩定轉染%小鼠NIH3T3細胞
24p3/SIP24%은정전염%소서NIH3T3세포
目的构建小鼠24p3基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH3T3细胞中24p3/SIP24蛋白的表达情况,初步鉴定24p3/SIP24蛋白介导铁向细胞内转运的生物学功能.方法RT-PCR自小鼠肺组织中克隆24p3 cDNA.用基因重组技术构建24p3-pcDNA3.0真核表达载体并行酶切和测序鉴定.脂质体DOTAP方法转染NIH3T3细胞,48 h后用G418筛选阳性克隆并培养扩增至21 d.对阳性克隆的培养基上清中24p3/SIP24蛋白的表达用ELISA和Westernblot分析,进一步用原子吸收分光光谱观察其介导铁向NIH3T3细胞内转运的生物学功能.结果成功克隆24p3cDNA并构建24p3-pcDNA3.0真核表达载体,筛选出稳定表达24p3/SIP24蛋白的NIH3T3细胞株,24p3/SIP24蛋白在NIH3T3细胞上清中获得表达,并能介导铁向NIH3T3细胞内转运.结论24p3基因在NIH3T3细胞中获得表达,有良好的生物学活性,为进一步研究24p3/SIP24蛋白介导铁转运的生物学功能及作用机制奠定了基础.
目的構建小鼠24p3基因真覈錶達載體併觀察其穩定轉染的NIH3T3細胞中24p3/SIP24蛋白的錶達情況,初步鑒定24p3/SIP24蛋白介導鐵嚮細胞內轉運的生物學功能.方法RT-PCR自小鼠肺組織中剋隆24p3 cDNA.用基因重組技術構建24p3-pcDNA3.0真覈錶達載體併行酶切和測序鑒定.脂質體DOTAP方法轉染NIH3T3細胞,48 h後用G418篩選暘性剋隆併培養擴增至21 d.對暘性剋隆的培養基上清中24p3/SIP24蛋白的錶達用ELISA和Westernblot分析,進一步用原子吸收分光光譜觀察其介導鐵嚮NIH3T3細胞內轉運的生物學功能.結果成功剋隆24p3cDNA併構建24p3-pcDNA3.0真覈錶達載體,篩選齣穩定錶達24p3/SIP24蛋白的NIH3T3細胞株,24p3/SIP24蛋白在NIH3T3細胞上清中穫得錶達,併能介導鐵嚮NIH3T3細胞內轉運.結論24p3基因在NIH3T3細胞中穫得錶達,有良好的生物學活性,為進一步研究24p3/SIP24蛋白介導鐵轉運的生物學功能及作用機製奠定瞭基礎.
목적구건소서24p3기인진핵표체재체병관찰기은정전염적NIH3T3세포중24p3/SIP24단백적표체정황,초보감정24p3/SIP24단백개도철향세포내전운적생물학공능.방법RT-PCR자소서폐조직중극륭24p3 cDNA.용기인중조기술구건24p3-pcDNA3.0진핵표체재체병행매절화측서감정.지질체DOTAP방법전염NIH3T3세포,48 h후용G418사선양성극륭병배양확증지21 d.대양성극륭적배양기상청중24p3/SIP24단백적표체용ELISA화Westernblot분석,진일보용원자흡수분광광보관찰기개도철향NIH3T3세포내전운적생물학공능.결과성공극륭24p3cDNA병구건24p3-pcDNA3.0진핵표체재체,사선출은정표체24p3/SIP24단백적NIH3T3세포주,24p3/SIP24단백재NIH3T3세포상청중획득표체,병능개도철향NIH3T3세포내전운.결론24p3기인재NIH3T3세포중획득표체,유량호적생물학활성,위진일보연구24p3/SIP24단백개도철전운적생물학공능급작용궤제전정료기출.
