重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2006年
6期
790-793
,共4页
季业伟%赵艳%王华%徐晓玉%周元国
季業偉%趙豔%王華%徐曉玉%週元國
계업위%조염%왕화%서효옥%주원국
热休克蛋白90%真核表达%应激耐受
熱休剋蛋白90%真覈錶達%應激耐受
열휴극단백90%진핵표체%응격내수
目的:构建小鼠Hsp84基因真核表达质粒.方法:采用逆转录、热降落PCR方法,扩增BALb/c小鼠Hsp84基因片段,将其连入pMD18-T载体,筛选阳性克隆、测序验证.然后以重组T载体为模板,PCR扩增目的序列,插入真核表达质粒pcD-NA3.1中,转化大肠杆菌DH5 α,通过琼脂糖电泳、双酶切挑选和验证阳性重组克隆.结果:RT-PCR自小鼠脑组织中扩增出目的基因片段,克隆入pMD18-T载体后,测序结果证明为BALb/c小鼠Hsp84基因.插入目的基因的真核表达载体的酶切谱与设计一致.结论:成功构建了小鼠Hsp84编码框全长的真核细胞表达质粒.
目的:構建小鼠Hsp84基因真覈錶達質粒.方法:採用逆轉錄、熱降落PCR方法,擴增BALb/c小鼠Hsp84基因片段,將其連入pMD18-T載體,篩選暘性剋隆、測序驗證.然後以重組T載體為模闆,PCR擴增目的序列,插入真覈錶達質粒pcD-NA3.1中,轉化大腸桿菌DH5 α,通過瓊脂糖電泳、雙酶切挑選和驗證暘性重組剋隆.結果:RT-PCR自小鼠腦組織中擴增齣目的基因片段,剋隆入pMD18-T載體後,測序結果證明為BALb/c小鼠Hsp84基因.插入目的基因的真覈錶達載體的酶切譜與設計一緻.結論:成功構建瞭小鼠Hsp84編碼框全長的真覈細胞錶達質粒.
목적:구건소서Hsp84기인진핵표체질립.방법:채용역전록、열강락PCR방법,확증BALb/c소서Hsp84기인편단,장기련입pMD18-T재체,사선양성극륭、측서험증.연후이중조T재체위모판,PCR확증목적서렬,삽입진핵표체질립pcD-NA3.1중,전화대장간균DH5 α,통과경지당전영、쌍매절도선화험증양성중조극륭.결과:RT-PCR자소서뇌조직중확증출목적기인편단,극륭입pMD18-T재체후,측서결과증명위BALb/c소서Hsp84기인.삽입목적기인적진핵표체재체적매절보여설계일치.결론:성공구건료소서Hsp84편마광전장적진핵세포표체질립.
