CAJ | 학술논문

分别以猪圆环病毒1型基因组和重组质粒pCI-PCV2-ORF1为模板,利用PCR扩增了猪圆环病毒1型和2型的ORF1基因,随后克隆到pET-28a(+)和pET-32a(+)两种原核表达载体上.测序正确的重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3),进行目的蛋白的诱导表达.SDS-PAGE和Western blot分析表明,猪圆环病毒1型和2型的ORF1均能在pET-28a和pET-32a中分别以重组蛋白His-Rep(40 Ku)和Trx-His-Rep(54 Ku)的形式表达.进一步纯化后测定重组蛋白的浓度,推算出猪圆环病毒1型和2型的His-Rep蛋白产量分别为34 mg/L菌液和14 mg/L菌液,Trx-His-Rep蛋白产量则为12 mg/L菌液和10 mg/L菌液.这些纯化的蛋白在Western blot中能够与猪抗猪圆环病毒2型阳性血清发生特异性反应,显示其具有良好的免疫学活性.本研究建立的猪圆环病毒重组Rep蛋白的原核表达系统及其纯化方法,为下一步开展Rep蛋白功能等相关研究奠定了基础.
분별이저원배병독1형기인조화중조질립pCI-PCV2-ORF1위모판,이용PCR확증료저원배병독1형화2형적ORF1기인,수후극륭도pET-28a(+)화pET-32a(+)량충원핵표체재체상.측서정학적중조질립분별전화E.coli BL21(DE3),진행목적단백적유도표체.SDS-PAGE화Western blot분석표명,저원배병독1형화2형적ORF1균능재pET-28a화pET-32a중분별이중조단백His-Rep(40 Ku)화Trx-His-Rep(54 Ku)적형식표체.진일보순화후측정중조단백적농도,추산출저원배병독1형화2형적His-Rep단백산량분별위34 mg/L균액화14 mg/L균액,Trx-His-Rep단백산량칙위12 mg/L균액화10 mg/L균액.저사순화적단백재Western blot중능구여저항저원배병독2형양성혈청발생특이성반응,현시기구유량호적면역학활성.본연구건립적저원배병독중조Rep단백적원핵표체계통급기순화방법,위하일보개전Rep단백공능등상관연구전정료기출.