CAJ | 학술논문

目的:由内皮前体细胞分化的内皮细胞与成熟平滑肌细胞联合培养可以为组织工程血管的形成提供更接近天然的条件.实验拟进一步证明两种细胞联合培养可促进血管内皮细胞生长,以及两种细胞的最适比例.方法:实验于2006-01/2007-05在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成.①实验材料:新鲜脐带取自国际第一妇婴保健医院,产妇知情同意.②实验方法及评估:从人脐动脉中用组织块培养法分离并原代培养血管平滑肌细胞,免疫荧光方法鉴定其平滑肌肌动蛋白表达情况;采用密度梯度离心法分离脐血中的内皮前体细胞,经体外定向诱导分化和免疫荧光方法鉴定其表型;无菌条件下制作Ⅰ型胶原凝胶,在其上以3:1～4:1的比例混匀联合培养内皮前体细胞与平滑肌细胞,并观察两种细胞联合培养时的形态,分析两种细胞最合适的种植比例;免疫荧光方法观察在Ⅰ型胶原凝胶联合培养中CD31、vWF的表达以及内皮细胞的生长情况.结果:①原代培养的平滑肌细胞呈典型"波峰谷"形态,荧光染色平滑肌肌动蛋白呈阳性.②脐血来源的内皮前体细胞定向诱导分化为内皮细胞后,呈现出"铺路石"样形态,表达CD31、vWF,结合荆豆凝集素,提示具备成熟内皮细胞特性.③在Ⅰ型胶原凝胶上两种细胞增殖力均旺盛,与平滑肌细胞以3:1～4:1的比例种植在I型胶原凝胶培养一段时间后,内皮前体细胞可从平滑肌细胞处得到支持,形成血管样网络结构.④共培养1周后,CD31与vWF阳性细胞即内皮前体细胞分化而来的内皮细胞互相连接,形成环形结构.结论:内皮前体细胞和平滑肌细胞以3:1～4:1共培养的模式可以促进微血管样结构的形成.
목적:유내피전체세포분화적내피세포여성숙평활기세포연합배양가이위조직공정혈관적형성제공경접근천연적조건.실험의진일보증명량충세포연합배양가촉진혈관내피세포생장,이급량충세포적최괄비례.방법:실험우2006-01/2007-05재복단대학상해의학원분자생물학실험실완성.①실험재료:신선제대취자국제제일부영보건의원,산부지정동의.②실험방법급평고:종인제동맥중용조직괴배양법분리병원대배양혈관평활기세포,면역형광방법감정기평활기기동단백표체정황;채용밀도제도리심법분리제혈중적내피전체세포,경체외정향유도분화화면역형광방법감정기표형;무균조건하제작Ⅰ형효원응효,재기상이3:1～4:1적비례혼균연합배양내피전체세포여평활기세포,병관찰량충세포연합배양시적형태,분석량충세포최합괄적충식비례;면역형광방법관찰재Ⅰ형효원응효연합배양중CD31、vWF적표체이급내피세포적생장정황.결과:①원대배양적평활기세포정전형"파봉곡"형태,형광염색평활기기동단백정양성.②제혈래원적내피전체세포정향유도분화위내피세포후,정현출"포로석"양형태,표체CD31、vWF,결합형두응집소,제시구비성숙내피세포특성.③재Ⅰ형효원응효상량충세포증식력균왕성,여평활기세포이3:1～4:1적비례충식재I형효원응효배양일단시간후,내피전체세포가종평활기세포처득도지지,형성혈관양망락결구.④공배양1주후,CD31여vWF양성세포즉내피전체세포분화이래적내피세포호상련접,형성배형결구.결론:내피전체세포화평활기세포이3:1～4:1공배양적모식가이촉진미혈관양결구적형성.