潍坊医学院学报
濰坊醫學院學報
유방의학원학보
JOURNAL OF WEIFANG MEDICAL COLLEGE
2008年
3期
199-201,插1
,共4页
牟东珍%梁淑娟%刘艳艳%王雪净%吴慧娜%李若葆
牟東珍%樑淑娟%劉豔豔%王雪淨%吳慧娜%李若葆
모동진%량숙연%류염염%왕설정%오혜나%리약보
肝癌%组织特异性表达%AFP启动子
肝癌%組織特異性錶達%AFP啟動子
간암%조직특이성표체%AFP계동자
目的 构建AFP最小启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体,观察其在小鼠H22肝癌细胞中的特异性表达.方法 从H22细胞总DNA和荧光载体pIRES2-EGFP中分别PCR扩增AFP最小启动子区序列和CMV增强子(ECMV),利用重叠延伸PCR方法(SOE)获得AFP启动子驱动的嵌合调控序列,将其克隆入pIRES2-EGFP载体,进行菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列测定.通过jetPEI方法转染H22肝癌细胞和YAC1淋巴瘤细胞,荧光显微镜下观察其表达的组织特异性.结果 从小鼠H22细胞DNA和pIRES2-EGFP中分别扩增得到229bp和324bp的片段,纯化后的PCR产物通过SOE扩增得到-537bp的条带,均与预期序列长度一致.SOE产物与pIRES2-EGFP连接,菌落PCR鉴定获得数个阳性克隆,质粒经Nde I+Nhe I限制性酶谱分析酶解出537bp条带,DNA序列分析证实重组载体中的嵌合DNA与GeneBank中小鼠AFP启动子和ECMV序列完全一致.结论 本研究成功构建了AFP启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达外源基因.
目的 構建AFP最小啟動子調控的小鼠肝癌組織特異性錶達載體,觀察其在小鼠H22肝癌細胞中的特異性錶達.方法 從H22細胞總DNA和熒光載體pIRES2-EGFP中分彆PCR擴增AFP最小啟動子區序列和CMV增彊子(ECMV),利用重疊延伸PCR方法(SOE)穫得AFP啟動子驅動的嵌閤調控序列,將其剋隆入pIRES2-EGFP載體,進行菌落PCR、限製性酶譜分析、DNA序列測定.通過jetPEI方法轉染H22肝癌細胞和YAC1淋巴瘤細胞,熒光顯微鏡下觀察其錶達的組織特異性.結果 從小鼠H22細胞DNA和pIRES2-EGFP中分彆擴增得到229bp和324bp的片段,純化後的PCR產物通過SOE擴增得到-537bp的條帶,均與預期序列長度一緻.SOE產物與pIRES2-EGFP連接,菌落PCR鑒定穫得數箇暘性剋隆,質粒經Nde I+Nhe I限製性酶譜分析酶解齣537bp條帶,DNA序列分析證實重組載體中的嵌閤DNA與GeneBank中小鼠AFP啟動子和ECMV序列完全一緻.結論 本研究成功構建瞭AFP啟動子調控的小鼠肝癌組織特異性錶達載體PafpIRES2-EGFP,該載體能夠在小鼠肝癌細胞中特異性錶達外源基因.
목적 구건AFP최소계동자조공적소서간암조직특이성표체재체,관찰기재소서H22간암세포중적특이성표체.방법 종H22세포총DNA화형광재체pIRES2-EGFP중분별PCR확증AFP최소계동자구서렬화CMV증강자(ECMV),이용중첩연신PCR방법(SOE)획득AFP계동자구동적감합조공서렬,장기극륭입pIRES2-EGFP재체,진행균락PCR、한제성매보분석、DNA서렬측정.통과jetPEI방법전염H22간암세포화YAC1림파류세포,형광현미경하관찰기표체적조직특이성.결과 종소서H22세포DNA화pIRES2-EGFP중분별확증득도229bp화324bp적편단,순화후적PCR산물통과SOE확증득도-537bp적조대,균여예기서렬장도일치.SOE산물여pIRES2-EGFP련접,균락PCR감정획득수개양성극륭,질립경Nde I+Nhe I한제성매보분석매해출537bp조대,DNA서렬분석증실중조재체중적감합DNA여GeneBank중소서AFP계동자화ECMV서렬완전일치.결론 본연구성공구건료AFP계동자조공적소서간암조직특이성표체재체PafpIRES2-EGFP,해재체능구재소서간암세포중특이성표체외원기인.
