CAJ | 학술논문

目的:采用基因克隆技术及原核表达技术重组人硫氧还蛋白(TRX),并证实重组TRX具有二硫键还原酶活性.方法:从人睾丸互补DNA(cDNA)文库克隆出人的TRX cDNA,采用限制性酶切方法构建pQE-32/TRX原核表达质粒,并在大肠杆菌M15中进行稳定表达,应用TALON 金属螯合树脂纯化重组人TRX蛋白.用Western印迹方法鉴定重组人TRX,并检测TRX的二硫键还原酶活性.结果:(1)克隆的人TRX cDNA序列与基因库(GeneBank)(X54539)序列比较,可译框架完全相同;(2)原核表达载体中含有TRX cDNA的全长序列;(3)经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,含质粒pQE-32/TRX的大肠杆菌成功表达出人的TRX;(4)活性检测证实重组TRX具有二硫键还原酶活性.结论:成功构建原核表达载体pQE-32/TRX,并重组出有活性的人TRX蛋白,可以用于保护性研究.
목적:채용기인극륭기술급원핵표체기술중조인류양환단백(TRX),병증실중조TRX구유이류건환원매활성.방법:종인고환호보DNA(cDNA)문고극륭출인적TRX cDNA,채용한제성매절방법구건pQE-32/TRX원핵표체질립,병재대장간균M15중진행은정표체,응용TALON 금속오합수지순화중조인TRX단백.용Western인적방법감정중조인TRX,병검측TRX적이류건환원매활성.결과:(1)극륭적인TRX cDNA서렬여기인고(GeneBank)(X54539)서렬비교,가역광가완전상동;(2)원핵표체재체중함유TRX cDNA적전장서렬;(3)경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도,함질립pQE-32/TRX적대장간균성공표체출인적TRX;(4)활성검측증실중조TRX구유이류건환원매활성.결론:성공구건원핵표체재체pQE-32/TRX,병중조출유활성적인TRX단백,가이용우보호성연구.