CAJ | 학술논문

目的探讨双氢青蒿素 (dihydroartemisinin,DHA) 对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)滋养体蛋白质的损伤作用.方法用改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体;设立实验组(DHA组)和正常对照组(C组).实验组用含双氢青蒿素的培养基(含LC50＝200μg/mL的DHA)培养;对照组培养基不含药物.提取各组虫体总蛋白,经Bradford法进行蛋白质定量,样本经2D-电泳和硝酸银染色后, 扫描检测凝胶电泳图蛋白点的数量和种类,获取蛋白质点匹配信息,挑选匹配性高的蛋白点,进行质谱(MALDI-TOF MS)分析.结果经双氢青蒿素作用后虫体总蛋白质含量(0.6993μg/mL)明显低于对照组(4.8241μg/mL),二者差异有显著性(P <0.001).蛋白质二维电泳凝胶图分析结果显示,正常对照组(C组)蛋白点密集,约1253个点,布满整块凝胶,蛋白表达量高(蛋白点颜色深且清晰、明亮);与此相反,实验组(DHA组)蛋白点显著减少,DHA作用6h后约617个点,作用12h后约326个点,蛋白表达量明显降低(蛋白点颜色浅,不清晰).其次,正常对照组与双氢青蒿素组的12kDa～30kDa、等电点pI 3.0～7.6范围内蛋白点表达量存在明显差异,即实验组该范围内大多数蛋白点完全消失, 45kD～60kDa的蛋白点仅剩6个点.质谱分析鉴定结果显示,在正常对照组胶图所选的80个匹配良好的蛋白点中,鉴定出6种骨架蛋白(14个点),而实验组(DHA组)蛋白胶图中相对应的蛋白点消失.结论双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的蛋白质具有明显的损伤作用,其中包括细胞骨架蛋白.
목적 탐토쌍경청호소 (dihydroartemisinin,DHA) 대체외배양적람씨가제편모충(Giardia lamblia)자양체단백질적손상작용.방법 용개량TYI-S-33배양기배양람씨가제편모충자양체;설립실험조(DHA조)화정상대조조(C조).실험조용함쌍경청호소적배양기(함LC50＝200μg/mL적DHA)배양;대조조배양기불함약물.제취각조충체총단백,경Bradford법진행단백질정량,양본경2D-전영화초산은염색후, 소묘검측응효전영도단백점적수량화충류,획취단백질점필배신식,도선필배성고적단백점,진행질보(MALDI-TOF MS)분석.결과 경쌍경청호소작용후충체총단백질함량(0.6993μg/mL)명현저우대조조(4.8241μg/mL),이자차이유현저성(P <0.001).단백질이유전영응효도분석결과현시,정상대조조(C조)단백점밀집,약1253개점,포만정괴응효,단백표체량고(단백점안색심차청석、명량);여차상반,실험조(DHA조)단백점현저감소,DHA작용6h후약617개점,작용12h후약326개점,단백표체량명현강저(단백점안색천,불청석).기차,정상대조조여쌍경청호소조적12kDa～30kDa、등전점pI 3.0～7.6범위내단백점표체량존재명현차이,즉실험조해범위내대다수단백점완전소실, 45kD～60kDa적단백점부잉6개점.질보분석감정결과현시,재정상대조조효도소선적80개필배량호적단백점중,감정출6충골가단백(14개점),이실험조(DHA조)단백효도중상대응적단백점소실.결론 쌍경청호소대람씨가제편모충자양체적단백질구유명현적손상작용,기중포괄세포골가단백.