微小牛蜱Bm91基因的原核表达
미소우비Bm91기인적원핵표체
Prokaryotic Expression of Bm91 Gene of Boophilus microplus
  • 万方数据
    动物医学进展 동물의학진전
    PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
    2010年 12期 6-9 ,共4页

    马米玲%刘军龙%关贵全%刘志杰%郝雪峰%王玙%李有全%刘爱红%任巧云%牛庆丽%殷宏%罗建勋

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    미소우비%Bm91기인%원핵표체
    根据GenBank收录的微小牛蜱Bm91基因序列设计一对表达引物,以微小牛蜱幼蜱总RNA反转录合成的cDNA为模板,扩增获得了Bm91基因,其长度为1908 bp,包含一个大小为1 833 bp的完整开放阅读框,编码611个氨基酸,该蛋白预期分子质量为83 ku.将Bm91基因片段亚克隆到原核表达载体pET-30a,构建重组原核表达载体pET-30a-Bm91,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,发现在0.8 mmol/LIPTG,诱导时间2 h,温度37℃条件下,目的重组蛋白表达量最大,约占蛋白总量的20%.SDS-PAGE检测表明,表达产物为分子质量为83 ku的融合蛋白,与预期大小一致;Western blot分析表明,表达产物能被兔抗微小牛蜱阳性血清所识别.
    근거GenBank수록적미소우비Bm91기인서렬설계일대표체인물,이미소우비유비총RNA반전록합성적cDNA위모판,확증획득료Bm91기인,기장도위1908 bp,포함일개대소위1 833 bp적완정개방열독광,편마611개안기산,해단백예기분자질량위83 ku.장Bm91기인편단아극륭도원핵표체재체pET-30a,구건중조원핵표체재체pET-30a-Bm91,전화BL21숙주균,경IPTG유도,발현재0.8 mmol/LIPTG,유도시간2 h,온도37℃조건하,목적중조단백표체량최대,약점단백총량적20%.SDS-PAGE검측표명,표체산물위분자질량위83 ku적융합단백,여예기대소일치;Western blot분석표명,표체산물능피토항미소우비양성혈청소식별.
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