江苏大学学报（医学版）
江囌大學學報（醫學版）
강소대학학보（의학판）
JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY (MEDICINE EDITION)
2011年
5期
390-393,401
,共5页
张严%龚爱华%金洁%邵根宝%彭琬昕
張嚴%龔愛華%金潔%邵根寶%彭琬昕
장엄%공애화%금길%소근보%팽완흔
体外DNA%同源重组%TrkA%神经生长因子%T4 DNA%聚合酶
體外DNA%同源重組%TrkA%神經生長因子%T4 DNA%聚閤酶
체외DNA%동원중조%TrkA%신경생장인자%T4 DNA%취합매
目的:利用体外DNA 同源重组的方法分别构建含神经生长因子(NGF)和神经生长因子受体(TrkA)基因的真核表达载体.方法:在引物5′加上一段与载体克隆位点两端碱基序列相同的序列,PCR扩增目的基因NGF和TrkA,线性载体片段和目的基因片段经T4 DNA 聚合酶的外切产生互补的单链DNA,然后37℃退火实现体外同源重组,转化并鉴定;将重组质粒转染293A细胞,免疫印迹鉴定目的基因的表达情况.结果:成功构建真核载体pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA,转染细胞后的表达产物相对分子质量分别是31×103和140×103.结论:与常规重组技术相比,体外DNA 同源重组技术是一种高效的DNA 重组方法,且不需考虑目的片段的限制性酶切位点.
目的:利用體外DNA 同源重組的方法分彆構建含神經生長因子(NGF)和神經生長因子受體(TrkA)基因的真覈錶達載體.方法:在引物5′加上一段與載體剋隆位點兩耑堿基序列相同的序列,PCR擴增目的基因NGF和TrkA,線性載體片段和目的基因片段經T4 DNA 聚閤酶的外切產生互補的單鏈DNA,然後37℃退火實現體外同源重組,轉化併鑒定;將重組質粒轉染293A細胞,免疫印跡鑒定目的基因的錶達情況.結果:成功構建真覈載體pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA,轉染細胞後的錶達產物相對分子質量分彆是31×103和140×103.結論:與常規重組技術相比,體外DNA 同源重組技術是一種高效的DNA 重組方法,且不需攷慮目的片段的限製性酶切位點.
목적:이용체외DNA 동원중조적방법분별구건함신경생장인자(NGF)화신경생장인자수체(TrkA)기인적진핵표체재체.방법:재인물5′가상일단여재체극륭위점량단감기서렬상동적서렬,PCR확증목적기인NGF화TrkA,선성재체편단화목적기인편단경T4 DNA 취합매적외절산생호보적단련DNA,연후37℃퇴화실현체외동원중조,전화병감정;장중조질립전염293A세포,면역인적감정목적기인적표체정황.결과:성공구건진핵재체pcDNA3.1-NGF화pcDNA3.1-TrkA,전염세포후적표체산물상대분자질량분별시31×103화140×103.결론:여상규중조기술상비,체외DNA 동원중조기술시일충고효적DNA 중조방법,차불수고필목적편단적한제성매절위점.
