华南农业大学学报
華南農業大學學報
화남농업대학학보
JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
4期
57-62
,共6页
李霞%刘霭珊%徐来祥%赵亚华
李霞%劉靄珊%徐來祥%趙亞華
리하%류애산%서래상%조아화
兔防御素基因%毕赤酵母%串联表达%抑菌机理
兔防禦素基因%畢赤酵母%串聯錶達%抑菌機理
토방어소기인%필적효모%천련표체%억균궤리
根据毕赤酵母Pichia pastoris密码子偏爱性重编兔防御素基因(Neutrophils peptide-1,pNP-1),设计4条引物搭桥合成.将pNP-1克隆到pPICZα-A载体,使用同尾酶Xho Ⅰ和SalⅠ在重组载体上构建多价串联体[pNP-1(2×)]和[ pNP-1(3×)],分别对这3个基因进行毕赤酵母表达,表达量依次为3.39、6.39和13.05 μg/mL.重组蛋白经溴化氢切割后,对得到的活性产物进行抑菌试验,结果表明,重组pNP-1蛋白对苏云金杆菌Bacillus thuringiensis等革兰阳性菌(G+)及大肠埃希菌Escherichia coli等革兰阴性菌(G-)均有抑菌活性,但对白色念珠菌Candida albicans 等真菌没有明显的抑菌活性.对pNP-1抑菌机理研究发现,细胞壁和DNA合成抑制剂对pNP-1抑菌活性有协同作用,而多种蛋白质和RNA合成抑制剂对pNP-1抑菌活性有抑制作用.
根據畢赤酵母Pichia pastoris密碼子偏愛性重編兔防禦素基因(Neutrophils peptide-1,pNP-1),設計4條引物搭橋閤成.將pNP-1剋隆到pPICZα-A載體,使用同尾酶Xho Ⅰ和SalⅠ在重組載體上構建多價串聯體[pNP-1(2×)]和[ pNP-1(3×)],分彆對這3箇基因進行畢赤酵母錶達,錶達量依次為3.39、6.39和13.05 μg/mL.重組蛋白經溴化氫切割後,對得到的活性產物進行抑菌試驗,結果錶明,重組pNP-1蛋白對囌雲金桿菌Bacillus thuringiensis等革蘭暘性菌(G+)及大腸埃希菌Escherichia coli等革蘭陰性菌(G-)均有抑菌活性,但對白色唸珠菌Candida albicans 等真菌沒有明顯的抑菌活性.對pNP-1抑菌機理研究髮現,細胞壁和DNA閤成抑製劑對pNP-1抑菌活性有協同作用,而多種蛋白質和RNA閤成抑製劑對pNP-1抑菌活性有抑製作用.
근거필적효모Pichia pastoris밀마자편애성중편토방어소기인(Neutrophils peptide-1,pNP-1),설계4조인물탑교합성.장pNP-1극륭도pPICZα-A재체,사용동미매Xho Ⅰ화SalⅠ재중조재체상구건다개천련체[pNP-1(2×)]화[ pNP-1(3×)],분별대저3개기인진행필적효모표체,표체량의차위3.39、6.39화13.05 μg/mL.중조단백경추화경절할후,대득도적활성산물진행억균시험,결과표명,중조pNP-1단백대소운금간균Bacillus thuringiensis등혁란양성균(G+)급대장애희균Escherichia coli등혁란음성균(G-)균유억균활성,단대백색념주균Candida albicans 등진균몰유명현적억균활성.대pNP-1억균궤리연구발현,세포벽화DNA합성억제제대pNP-1억균활성유협동작용,이다충단백질화RNA합성억제제대pNP-1억균활성유억제작용.
