临床消化病杂志
臨床消化病雜誌
림상소화병잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL GASTROENTEROLOGY
2012年
1期
14-16
,共3页
短发夹状双链RNA%RhoA基因%肝癌细胞
短髮夾狀雙鏈RNA%RhoA基因%肝癌細胞
단발협상쌍련RNA%RhoA기인%간암세포
目的 构建针对人RhoA基因的短发夹状双链RNA(shRNA)真核表达载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2 RhoA表达的特异性抑制效应.方法 设计合成针对RhoA mRNA编码序列两个不同靶点的核苷酸片断,并定向克隆到真核表达载体Pgenesil-2的U6启动子下,构建重组质粒phsRNA- RhoA1和pshRNA- RhoA2,不针对任何基因组序列的重组质粒pshRNA- HK作为阴性对照.脂质体法转染到HepG2细胞后,应用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)和蛋白免疫印迹法( Western- blot)分别检测RhoA基因表达的抑制效应.结果 酶切鉴定和测序结果证实重组质粒均构建成功.转染HepG2后,pshRNA- RhoA2组RhoA基因mRNA和蛋白的表达水平均显著降低,与pshRNA-HK组和空白细胞组相比,差异有统计学意义(r=- 19.28,t=-7.08,P＜0.05).而pshRNA- RhoA1组抑制效应不明显,差异无统计学意义(r=-0.16,t=-0.30,P＞0.05).结论 构建的重组质粒pshRNA- RhoA2能特异有效地抑制RhoA基因在肝癌细胞HepG2中的表达,为进一步研究RhoA基因在肝癌中的作用提供了有效的分子工具.
目的 構建針對人RhoA基因的短髮夾狀雙鏈RNA(shRNA)真覈錶達載體,觀察其對人肝癌細胞株HepG2 RhoA錶達的特異性抑製效應.方法 設計閤成針對RhoA mRNA編碼序列兩箇不同靶點的覈苷痠片斷,併定嚮剋隆到真覈錶達載體Pgenesil-2的U6啟動子下,構建重組質粒phsRNA- RhoA1和pshRNA- RhoA2,不針對任何基因組序列的重組質粒pshRNA- HK作為陰性對照.脂質體法轉染到HepG2細胞後,應用逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT- PCR)和蛋白免疫印跡法( Western- blot)分彆檢測RhoA基因錶達的抑製效應.結果 酶切鑒定和測序結果證實重組質粒均構建成功.轉染HepG2後,pshRNA- RhoA2組RhoA基因mRNA和蛋白的錶達水平均顯著降低,與pshRNA-HK組和空白細胞組相比,差異有統計學意義(r=- 19.28,t=-7.08,P＜0.05).而pshRNA- RhoA1組抑製效應不明顯,差異無統計學意義(r=-0.16,t=-0.30,P＞0.05).結論 構建的重組質粒pshRNA- RhoA2能特異有效地抑製RhoA基因在肝癌細胞HepG2中的錶達,為進一步研究RhoA基因在肝癌中的作用提供瞭有效的分子工具.
목적 구건침대인RhoA기인적단발협상쌍련RNA(shRNA)진핵표체재체,관찰기대인간암세포주HepG2 RhoA표체적특이성억제효응.방법 설계합성침대RhoA mRNA편마서렬량개불동파점적핵감산편단,병정향극륭도진핵표체재체Pgenesil-2적U6계동자하,구건중조질립phsRNA- RhoA1화pshRNA- RhoA2,불침대임하기인조서렬적중조질립pshRNA- HK작위음성대조.지질체법전염도HepG2세포후,응용역전록취합매련반응(RT- PCR)화단백면역인적법( Western- blot)분별검측RhoA기인표체적억제효응.결과 매절감정화측서결과증실중조질립균구건성공.전염HepG2후,pshRNA- RhoA2조RhoA기인mRNA화단백적표체수평균현저강저,여pshRNA-HK조화공백세포조상비,차이유통계학의의(r=- 19.28,t=-7.08,P＜0.05).이pshRNA- RhoA1조억제효응불명현,차이무통계학의의(r=-0.16,t=-0.30,P＞0.05).결론 구건적중조질립pshRNA- RhoA2능특이유효지억제RhoA기인재간암세포HepG2중적표체,위진일보연구RhoA기인재간암중적작용제공료유효적분자공구.
