水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2012年
4期
626-633
,共8页
黎炯%叶星%可小丽%卢迈新%迟妍妍%田园园
黎炯%葉星%可小麗%盧邁新%遲妍妍%田園園
려형%협성%가소려%로매신%지연연%전완완
罗非鱼%无乳链球菌%表面免疫原性蛋白%原核表达%免疫原性%抗体%相对保护率
囉非魚%無乳鏈毬菌%錶麵免疫原性蛋白%原覈錶達%免疫原性%抗體%相對保護率
라비어%무유련구균%표면면역원성단백%원핵표체%면역원성%항체%상대보호솔
表面免疫原性蛋白(Surface Immunogenic Protein,Sip)是B群链球菌(Group BStreptococcus,GBS)的一种表面蛋白,在GBS多种血清型的菌株中均有表达.研究从实验室分离到的罗非鱼无乳链球菌广东株的基因组DNA中扩增出Sip基因,构建原核表达载体pColdII-Sip,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)菌株.经诱导表达、SDS-PAGE电泳检测显示重组蛋白主要以可溶形式表达.重组蛋白用亲和层析的方法纯化,蛋白纯度达98％.纯化后的重组蛋白免疫罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT strain)以分析其免疫原性.受免鱼免疫14d后进行人工攻毒试验,免疫组的相对保护率为70％-87％.酶联免疫吸附试验(Elisa)显示受免鱼对重组蛋白产生了较好的免疫应答,免疫剂量为3 tg/g和5 μg/g时受免鱼血清抗体滴度可达1:128000.研究结果显示重组蛋白Sip具有较强的免疫原性和保护作用,Sip基因可作为罗非鱼链球菌基因工程亚单位疫苗候选基因.
錶麵免疫原性蛋白(Surface Immunogenic Protein,Sip)是B群鏈毬菌(Group BStreptococcus,GBS)的一種錶麵蛋白,在GBS多種血清型的菌株中均有錶達.研究從實驗室分離到的囉非魚無乳鏈毬菌廣東株的基因組DNA中擴增齣Sip基因,構建原覈錶達載體pColdII-Sip,轉化大腸桿菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)菌株.經誘導錶達、SDS-PAGE電泳檢測顯示重組蛋白主要以可溶形式錶達.重組蛋白用親和層析的方法純化,蛋白純度達98％.純化後的重組蛋白免疫囉非魚(Oreochromis niloticus,GIFT strain)以分析其免疫原性.受免魚免疫14d後進行人工攻毒試驗,免疫組的相對保護率為70％-87％.酶聯免疫吸附試驗(Elisa)顯示受免魚對重組蛋白產生瞭較好的免疫應答,免疫劑量為3 tg/g和5 μg/g時受免魚血清抗體滴度可達1:128000.研究結果顯示重組蛋白Sip具有較彊的免疫原性和保護作用,Sip基因可作為囉非魚鏈毬菌基因工程亞單位疫苗候選基因.
표면면역원성단백(Surface Immunogenic Protein,Sip)시B군련구균(Group BStreptococcus,GBS)적일충표면단백,재GBS다충혈청형적균주중균유표체.연구종실험실분리도적라비어무유련구균엄동주적기인조DNA중확증출Sip기인,구건원핵표체재체pColdII-Sip,전화대장간균(Escherichia coli)BL21 (DE3)균주.경유도표체、SDS-PAGE전영검측현시중조단백주요이가용형식표체.중조단백용친화층석적방법순화,단백순도체98％.순화후적중조단백면역라비어(Oreochromis niloticus,GIFT strain)이분석기면역원성.수면어면역14d후진행인공공독시험,면역조적상대보호솔위70％-87％.매련면역흡부시험(Elisa)현시수면어대중조단백산생료교호적면역응답,면역제량위3 tg/g화5 μg/g시수면어혈청항체적도가체1:128000.연구결과현시중조단백Sip구유교강적면역원성화보호작용,Sip기인가작위라비어련구균기인공정아단위역묘후선기인.
