中国血管外科杂志（电子版）
中國血管外科雜誌（電子版）
중국혈관외과잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF VASCULAR SURGERY(ELECTRONIC VERSION)
2012年
2期
108-111,114
,共5页
康涛%李晓强%孟庆友%范国华%唐军建
康濤%李曉彊%孟慶友%範國華%唐軍建
강도%리효강%맹경우%범국화%당군건
超顺磁性氧化铁%血管内皮祖细胞%磁共振成像%干细胞示踪
超順磁性氧化鐵%血管內皮祖細胞%磁共振成像%榦細胞示蹤
초순자성양화철%혈관내피조세포%자공진성상%간세포시종
目的 研究新型超顺磁性氧化铁(SPIO)标记骨髓源血管内皮祖细胞(EPCs)对其生物学影响,提高其标记效率及安全性.方法 采用梯度离心结合贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓源EPCs并鉴定,以3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTS)修饰Fe2O3配制成SPIO,用六种不同浓度SPIO(0 μg/ml、6.25 μg/ml、12.5 μg/ml、25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml)分别转染标记EPCs,对标记后的EPCs行普鲁士蓝染色、台盼蓝染色、透射电镜、噻唑蓝(MTT)检测、流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞周期,探讨不同SPIO浓度对EPCs标记效率、细胞活性及增殖的影响.结果 普鲁士蓝染色显示EPCs呈浓度依赖性摄取SPIO,培养基中Fe3+浓度为25 μg/ml时,标记效率最高,可见95％以上EPCs普鲁士蓝染色阳性;当Fe3+浓度小于12.5 μg/ml时,染色阳性细胞数小于50％;当Fe3+浓度为100μg/ml时活细胞数目小于40％,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).台盼蓝染色显示随着标记浓度的升高,细胞活力逐渐升高.当SPIO浓度超过50 μg/ml,细胞活性逐渐降低.透射电镜可见EPCs超微结构保存良好,大量的高密度SPIO颗粒,主要位于溶酶体内、滑面内质网、线粒体等细胞器的膜结构上.MTT测试及细胞凋亡与周期检测表明SPIO标记对EPCs存活、增殖的能力无明显影响,标记后的EPCs可用于进一步干细胞示踪研究.结论 梯密度离心结合贴壁法可分离出血管内皮祖细胞进行体外增殖分化.APTS修饰Fe2O3配制而成的新型SPIO可简便标记EPCs,并且在适当浓度下对MSCs的生物学活性没有影响,为后期的活体MRI示踪于细胞移植实验奠定基础.
目的 研究新型超順磁性氧化鐵(SPIO)標記骨髓源血管內皮祖細胞(EPCs)對其生物學影響,提高其標記效率及安全性.方法 採用梯度離心結閤貼壁法分離純化SD大鼠骨髓源EPCs併鑒定,以3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTS)脩飾Fe2O3配製成SPIO,用六種不同濃度SPIO(0 μg/ml、6.25 μg/ml、12.5 μg/ml、25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml)分彆轉染標記EPCs,對標記後的EPCs行普魯士藍染色、檯盼藍染色、透射電鏡、噻唑藍(MTT)檢測、流式細胞儀檢測細胞凋亡與細胞週期,探討不同SPIO濃度對EPCs標記效率、細胞活性及增殖的影響.結果 普魯士藍染色顯示EPCs呈濃度依賴性攝取SPIO,培養基中Fe3+濃度為25 μg/ml時,標記效率最高,可見95％以上EPCs普魯士藍染色暘性;噹Fe3+濃度小于12.5 μg/ml時,染色暘性細胞數小于50％;噹Fe3+濃度為100μg/ml時活細胞數目小于40％,與對照組比較差異有統計學意義(P<0.05).檯盼藍染色顯示隨著標記濃度的升高,細胞活力逐漸升高.噹SPIO濃度超過50 μg/ml,細胞活性逐漸降低.透射電鏡可見EPCs超微結構保存良好,大量的高密度SPIO顆粒,主要位于溶酶體內、滑麵內質網、線粒體等細胞器的膜結構上.MTT測試及細胞凋亡與週期檢測錶明SPIO標記對EPCs存活、增殖的能力無明顯影響,標記後的EPCs可用于進一步榦細胞示蹤研究.結論 梯密度離心結閤貼壁法可分離齣血管內皮祖細胞進行體外增殖分化.APTS脩飾Fe2O3配製而成的新型SPIO可簡便標記EPCs,併且在適噹濃度下對MSCs的生物學活性沒有影響,為後期的活體MRI示蹤于細胞移植實驗奠定基礎.
목적 연구신형초순자성양화철(SPIO)표기골수원혈관내피조세포(EPCs)대기생물학영향,제고기표기효솔급안전성.방법 채용제도리심결합첩벽법분리순화SD대서골수원EPCs병감정,이3-안병기삼을양기규완(APTS)수식Fe2O3배제성SPIO,용륙충불동농도SPIO(0 μg/ml、6.25 μg/ml、12.5 μg/ml、25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml)분별전염표기EPCs,대표기후적EPCs행보로사람염색、태반람염색、투사전경、새서람(MTT)검측、류식세포의검측세포조망여세포주기,탐토불동SPIO농도대EPCs표기효솔、세포활성급증식적영향.결과 보로사람염색현시EPCs정농도의뢰성섭취SPIO,배양기중Fe3+농도위25 μg/ml시,표기효솔최고,가견95％이상EPCs보로사람염색양성;당Fe3+농도소우12.5 μg/ml시,염색양성세포수소우50％;당Fe3+농도위100μg/ml시활세포수목소우40％,여대조조비교차이유통계학의의(P<0.05).태반람염색현시수착표기농도적승고,세포활력축점승고.당SPIO농도초과50 μg/ml,세포활성축점강저.투사전경가견EPCs초미결구보존량호,대량적고밀도SPIO과립,주요위우용매체내、활면내질망、선립체등세포기적막결구상.MTT측시급세포조망여주기검측표명SPIO표기대EPCs존활、증식적능력무명현영향,표기후적EPCs가용우진일보간세포시종연구.결론 제밀도리심결합첩벽법가분리출혈관내피조세포진행체외증식분화.APTS수식Fe2O3배제이성적신형SPIO가간편표기EPCs,병차재괄당농도하대MSCs적생물학활성몰유영향,위후기적활체MRI시종우세포이식실험전정기출.
