中华血液学杂志
中華血液學雜誌
중화혈액학잡지
Chinese Journal of Hematology
2006年
11期
757-761
,共5页
王向玲%纪春岩%马道新%赵建强%侯明%余海青%臧绍蕾
王嚮玲%紀春巖%馬道新%趙建彊%侯明%餘海青%臧紹蕾
왕향령%기춘암%마도신%조건강%후명%여해청%장소뢰
基因,mdr1%自杀基因%基因治疗%K562细胞
基因,mdr1%自殺基因%基因治療%K562細胞
기인,mdr1%자살기인%기인치료%K562세포
目的 构建多药耐药基因(mdr1)启动子控制的胸苷激酶-胞嘧啶脱氨酶(CD-TK)双自杀基因真核表达载体,研究其对耐药白血病细胞K562/A02的靶向杀伤作用.方法 利用分子克隆技术构建pcDNA3-mdr1P-CD-TK真核表达载体,脂质体介导法转染K562、K562/A02细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞株.用PCR、RT-PCR鉴定TK、CD基因的稳定转染与表达,加用不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)、5-氟胞嘧啶(5-FC)培养4 d,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 成功构建了mdr1启动子控制的CD-TK双自杀基因真核表达载体,脂质体成功转染细胞后,经G418筛选获得稳定转染细胞株.PCR结果显示,CD、TK基因均稳定存在于K562、K562/A02细胞中,RT-PCR结果显示K562/A02-CD-TK细胞有CD、TK基因特异性条带表达,而K562-CD-TK细胞无特异性条带.加入GCV、5-FC后,与K562-CD-TK细胞相比,K562/A02-CD-TK细胞存活率明显降低(在60μg/ml GCV和600μg/ml 5-FC联合作用后两种细胞存活率分别为85.04%和41.13%)(P＜0.05),凋亡率明显升高(同样浓度下分别为2.93%,10.27%).结论 mdr1启动子驱动的CD-TK双自杀基因系统可以靶向杀伤多药耐药的白血病细胞.
目的 構建多藥耐藥基因(mdr1)啟動子控製的胸苷激酶-胞嘧啶脫氨酶(CD-TK)雙自殺基因真覈錶達載體,研究其對耐藥白血病細胞K562/A02的靶嚮殺傷作用.方法 利用分子剋隆技術構建pcDNA3-mdr1P-CD-TK真覈錶達載體,脂質體介導法轉染K562、K562/A02細胞,通過G418篩選穫得穩定轉染的細胞株.用PCR、RT-PCR鑒定TK、CD基因的穩定轉染與錶達,加用不同濃度的丙氧鳥苷(GCV)、5-氟胞嘧啶(5-FC)培養4 d,用四甲基偶氮唑藍(MTT)法測定細胞存活率,用流式細胞術檢測細胞凋亡率.結果 成功構建瞭mdr1啟動子控製的CD-TK雙自殺基因真覈錶達載體,脂質體成功轉染細胞後,經G418篩選穫得穩定轉染細胞株.PCR結果顯示,CD、TK基因均穩定存在于K562、K562/A02細胞中,RT-PCR結果顯示K562/A02-CD-TK細胞有CD、TK基因特異性條帶錶達,而K562-CD-TK細胞無特異性條帶.加入GCV、5-FC後,與K562-CD-TK細胞相比,K562/A02-CD-TK細胞存活率明顯降低(在60μg/ml GCV和600μg/ml 5-FC聯閤作用後兩種細胞存活率分彆為85.04%和41.13%)(P＜0.05),凋亡率明顯升高(同樣濃度下分彆為2.93%,10.27%).結論 mdr1啟動子驅動的CD-TK雙自殺基因繫統可以靶嚮殺傷多藥耐藥的白血病細胞.
목적 구건다약내약기인(mdr1)계동자공제적흉감격매-포밀정탈안매(CD-TK)쌍자살기인진핵표체재체,연구기대내약백혈병세포K562/A02적파향살상작용.방법 이용분자극륭기술구건pcDNA3-mdr1P-CD-TK진핵표체재체,지질체개도법전염K562、K562/A02세포,통과G418사선획득은정전염적세포주.용PCR、RT-PCR감정TK、CD기인적은정전염여표체,가용불동농도적병양조감(GCV)、5-불포밀정(5-FC)배양4 d,용사갑기우담서람(MTT)법측정세포존활솔,용류식세포술검측세포조망솔.결과 성공구건료mdr1계동자공제적CD-TK쌍자살기인진핵표체재체,지질체성공전염세포후,경G418사선획득은정전염세포주.PCR결과현시,CD、TK기인균은정존재우K562、K562/A02세포중,RT-PCR결과현시K562/A02-CD-TK세포유CD、TK기인특이성조대표체,이K562-CD-TK세포무특이성조대.가입GCV、5-FC후,여K562-CD-TK세포상비,K562/A02-CD-TK세포존활솔명현강저(재60μg/ml GCV화600μg/ml 5-FC연합작용후량충세포존활솔분별위85.04%화41.13%)(P＜0.05),조망솔명현승고(동양농도하분별위2.93%,10.27%).결론 mdr1계동자구동적CD-TK쌍자살기인계통가이파향살상다약내약적백혈병세포.
