实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2010年
11期
848-850,868
,共4页
王军%范亚珍%陈海%朱登纳%吴值荣%侯艳艳
王軍%範亞珍%陳海%硃登納%吳值榮%侯豔豔
왕군%범아진%진해%주등납%오치영%후염염
Foxg1%Nestin%脐血%神经干细胞%细胞培养%诱导分化
Foxg1%Nestin%臍血%神經榦細胞%細胞培養%誘導分化
Foxg1%Nestin%제혈%신경간세포%세포배양%유도분화
目的 探讨人脐血单个核细胞(UBC-MNCs)体外分离培养和定向诱导分化为神经干细胞(NSCs)的机制,观察培养细胞增殖分化情况,检测NSCs中Foxg1和Nestin基因mRNA的表达情况及相互关系.方法 从脐血中分离出UBC-MNCs,用含人表皮细胞生长因子(hEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和B27因子的Neurobasal培养基联合诱导其向NSCs方向分化,观察NSCs增殖分化及形态学特点;免疫组织化学法检测培养细胞中神经细胞标志抗原巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记靶细胞,并测定增殖指数;RT-PCR法检测诱导前、培养3 d、6 d、9 d、12 d细胞中Foxg1和Nestin基因mRNA的表达变化.结果 UBC-MNCs可定向诱导分化为神经元样细胞,表达Nestin、NSE、GFAP标记抗原.Brdu标记细胞阳性率达90%.Foxg1 mRNA在诱导前细胞中低表达,诱导后逐渐升高(P＜0.05),6 d达高峰,后逐渐下降(P＜0.05);Nestin mRNA表达逐渐升高(P＜0.05).结论 体外诱导培养可获得UBC-MNCs源性NSCs,表达神经细胞特异性标志物Nestin、NSE和GFAP蛋白,Foxg1和Nestin基因表达明显增强,是NSCs增殖分化的关键调控因子.脐血能够成为NSCs的新来源.
目的 探討人臍血單箇覈細胞(UBC-MNCs)體外分離培養和定嚮誘導分化為神經榦細胞(NSCs)的機製,觀察培養細胞增殖分化情況,檢測NSCs中Foxg1和Nestin基因mRNA的錶達情況及相互關繫.方法 從臍血中分離齣UBC-MNCs,用含人錶皮細胞生長因子(hEGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和B27因子的Neurobasal培養基聯閤誘導其嚮NSCs方嚮分化,觀察NSCs增殖分化及形態學特點;免疫組織化學法檢測培養細胞中神經細胞標誌抗原巢蛋白(Nestin)、神經元特異性烯醇化酶(NSE)、膠質纖維痠性蛋白(GFAP)的錶達;5-溴-2-脫氧尿嘧啶覈苷(Brdu)標記靶細胞,併測定增殖指數;RT-PCR法檢測誘導前、培養3 d、6 d、9 d、12 d細胞中Foxg1和Nestin基因mRNA的錶達變化.結果 UBC-MNCs可定嚮誘導分化為神經元樣細胞,錶達Nestin、NSE、GFAP標記抗原.Brdu標記細胞暘性率達90%.Foxg1 mRNA在誘導前細胞中低錶達,誘導後逐漸升高(P＜0.05),6 d達高峰,後逐漸下降(P＜0.05);Nestin mRNA錶達逐漸升高(P＜0.05).結論 體外誘導培養可穫得UBC-MNCs源性NSCs,錶達神經細胞特異性標誌物Nestin、NSE和GFAP蛋白,Foxg1和Nestin基因錶達明顯增彊,是NSCs增殖分化的關鍵調控因子.臍血能夠成為NSCs的新來源.
목적 탐토인제혈단개핵세포(UBC-MNCs)체외분리배양화정향유도분화위신경간세포(NSCs)적궤제,관찰배양세포증식분화정황,검측NSCs중Foxg1화Nestin기인mRNA적표체정황급상호관계.방법 종제혈중분리출UBC-MNCs,용함인표피세포생장인자(hEGF)、감성성섬유세포생장인자(bFGF)화B27인자적Neurobasal배양기연합유도기향NSCs방향분화,관찰NSCs증식분화급형태학특점;면역조직화학법검측배양세포중신경세포표지항원소단백(Nestin)、신경원특이성희순화매(NSE)、효질섬유산성단백(GFAP)적표체;5-추-2-탈양뇨밀정핵감(Brdu)표기파세포,병측정증식지수;RT-PCR법검측유도전、배양3 d、6 d、9 d、12 d세포중Foxg1화Nestin기인mRNA적표체변화.결과 UBC-MNCs가정향유도분화위신경원양세포,표체Nestin、NSE、GFAP표기항원.Brdu표기세포양성솔체90%.Foxg1 mRNA재유도전세포중저표체,유도후축점승고(P＜0.05),6 d체고봉,후축점하강(P＜0.05);Nestin mRNA표체축점승고(P＜0.05).결론 체외유도배양가획득UBC-MNCs원성NSCs,표체신경세포특이성표지물Nestin、NSE화GFAP단백,Foxg1화Nestin기인표체명현증강,시NSCs증식분화적관건조공인자.제혈능구성위NSCs적신래원.
