河南医学研究
河南醫學研究
하남의학연구
HENAN MEDICAL RESEARCH
2012年
2期
148-151
,共4页
刘素娜%张艳%张晶敏%韩立%江金花%周玉冰%王庆端
劉素娜%張豔%張晶敏%韓立%江金花%週玉冰%王慶耑
류소나%장염%장정민%한립%강금화%주옥빙%왕경단
荧光定量聚合酶链式反应%SYBR Green Ⅰ%细胞周期素E%肝癌
熒光定量聚閤酶鏈式反應%SYBR Green Ⅰ%細胞週期素E%肝癌
형광정량취합매련식반응%SYBR Green Ⅰ%세포주기소E%간암
目的:建立SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR定量检测小鼠肝癌模型中细胞周期蛋白cyclin E mRNA的方法.方法:以cyclinE和β-actin的PCR产物为阳性模板,分别将二者cDNA产物进行10倍梯度稀释,建立双标准曲线,应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测cyclin E和β-actin mRNA含量,对熔解曲线进行分析确定扩增产物的特异性.结果:建立的标准曲线线性关系良好,相关系数r均为-1.00,cyclin E和β-actin扩增效率分别为0.91和0.93,熔解曲线分析显示均为单峰,特异扩增产物的Tm值分别为(81.84±0.28)℃和(89.15±0.26)℃.10-4 Cyclin E和β-actin cDNA标本日间变异系数(CV)和批内CV分别为1.02％、1.45％和0.90％、1.48％.结论:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR定量检测cyclin E mRNA是一种方便快捷、经济实惠、灵敏度高、特异性好的方法,为cyclin E的进一步研究奠定方法学基础.
目的:建立SYBR Green Ⅰ實時熒光PCR定量檢測小鼠肝癌模型中細胞週期蛋白cyclin E mRNA的方法.方法:以cyclinE和β-actin的PCR產物為暘性模闆,分彆將二者cDNA產物進行10倍梯度稀釋,建立雙標準麯線,應用SYBR Green Ⅰ實時熒光定量PCR檢測cyclin E和β-actin mRNA含量,對鎔解麯線進行分析確定擴增產物的特異性.結果:建立的標準麯線線性關繫良好,相關繫數r均為-1.00,cyclin E和β-actin擴增效率分彆為0.91和0.93,鎔解麯線分析顯示均為單峰,特異擴增產物的Tm值分彆為(81.84±0.28)℃和(89.15±0.26)℃.10-4 Cyclin E和β-actin cDNA標本日間變異繫數(CV)和批內CV分彆為1.02％、1.45％和0.90％、1.48％.結論:SYBR Green Ⅰ實時熒光PCR定量檢測cyclin E mRNA是一種方便快捷、經濟實惠、靈敏度高、特異性好的方法,為cyclin E的進一步研究奠定方法學基礎.
목적:건립SYBR Green Ⅰ실시형광PCR정량검측소서간암모형중세포주기단백cyclin E mRNA적방법.방법:이cyclinE화β-actin적PCR산물위양성모판,분별장이자cDNA산물진행10배제도희석,건립쌍표준곡선,응용SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR검측cyclin E화β-actin mRNA함량,대용해곡선진행분석학정확증산물적특이성.결과:건립적표준곡선선성관계량호,상관계수r균위-1.00,cyclin E화β-actin확증효솔분별위0.91화0.93,용해곡선분석현시균위단봉,특이확증산물적Tm치분별위(81.84±0.28)℃화(89.15±0.26)℃.10-4 Cyclin E화β-actin cDNA표본일간변이계수(CV)화비내CV분별위1.02％、1.45％화0.90％、1.48％.결론:SYBR Green Ⅰ실시형광PCR정량검측cyclin E mRNA시일충방편쾌첩、경제실혜、령민도고、특이성호적방법,위cyclin E적진일보연구전정방법학기출.
