细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
12期
1103-1105
,共3页
雷俊川%宫卫东%赵亚%姜河%刘忠湘%易军
雷俊川%宮衛東%趙亞%薑河%劉忠湘%易軍
뢰준천%궁위동%조아%강하%류충상%역군
四环素调控系统%Cp%肝细胞特异性%荧光素酶
四環素調控繫統%Cp%肝細胞特異性%熒光素酶
사배소조공계통%Cp%간세포특이성%형광소매
目的:分析四环素调控系统对乙型肝炎病毒核心启动子(Cp)活性及组织特异性的影响.方法:利用PCR从质粒pTL-8扩增7个Teto序列,并将其克隆入T载体pMD19-T Simple中.测序正确后将7个Teto序列亚克隆入pGL3-Basic/Cp荧光素酶报告基因质粒中Cp启动子的上游,以构建质粒pGL3-Basic/7t/Cp.将能表达TetR的质粒pTL-8的荧光素酶编码基因切除后,与pGL3-Basic/7t/Cp共转染肝癌细胞系HepG2,宫颈癌细胞系HeLa,绿猴肾细胞系COS-7,乳腺癌细胞系MDA-MB-231和结肠癌细胞系HT-29,通过双荧光素酶检测系统检测荧光素酶在这些不同细胞系中的活性,以鉴定四环素调控系统对Cp活性及组织特异性的影响.结果:成功构建了质粒pGL3-Basic/7t/Cp,将其转染入不同组织来源的细胞系后表明将7个teto序列克隆入Cp上游后增强了Cp在各细胞系中的活性.结论:四环素调控系统明显增强了Cp的转录活性.但同时,Cp失去了其组织特异性的特点,即在这些细胞系中均有较强活性.
目的:分析四環素調控繫統對乙型肝炎病毒覈心啟動子(Cp)活性及組織特異性的影響.方法:利用PCR從質粒pTL-8擴增7箇Teto序列,併將其剋隆入T載體pMD19-T Simple中.測序正確後將7箇Teto序列亞剋隆入pGL3-Basic/Cp熒光素酶報告基因質粒中Cp啟動子的上遊,以構建質粒pGL3-Basic/7t/Cp.將能錶達TetR的質粒pTL-8的熒光素酶編碼基因切除後,與pGL3-Basic/7t/Cp共轉染肝癌細胞繫HepG2,宮頸癌細胞繫HeLa,綠猴腎細胞繫COS-7,乳腺癌細胞繫MDA-MB-231和結腸癌細胞繫HT-29,通過雙熒光素酶檢測繫統檢測熒光素酶在這些不同細胞繫中的活性,以鑒定四環素調控繫統對Cp活性及組織特異性的影響.結果:成功構建瞭質粒pGL3-Basic/7t/Cp,將其轉染入不同組織來源的細胞繫後錶明將7箇teto序列剋隆入Cp上遊後增彊瞭Cp在各細胞繫中的活性.結論:四環素調控繫統明顯增彊瞭Cp的轉錄活性.但同時,Cp失去瞭其組織特異性的特點,即在這些細胞繫中均有較彊活性.
목적:분석사배소조공계통대을형간염병독핵심계동자(Cp)활성급조직특이성적영향.방법:이용PCR종질립pTL-8확증7개Teto서렬,병장기극륭입T재체pMD19-T Simple중.측서정학후장7개Teto서렬아극륭입pGL3-Basic/Cp형광소매보고기인질립중Cp계동자적상유,이구건질립pGL3-Basic/7t/Cp.장능표체TetR적질립pTL-8적형광소매편마기인절제후,여pGL3-Basic/7t/Cp공전염간암세포계HepG2,궁경암세포계HeLa,록후신세포계COS-7,유선암세포계MDA-MB-231화결장암세포계HT-29,통과쌍형광소매검측계통검측형광소매재저사불동세포계중적활성,이감정사배소조공계통대Cp활성급조직특이성적영향.결과:성공구건료질립pGL3-Basic/7t/Cp,장기전염입불동조직래원적세포계후표명장7개teto서렬극륭입Cp상유후증강료Cp재각세포계중적활성.결론:사배소조공계통명현증강료Cp적전록활성.단동시,Cp실거료기조직특이성적특점,즉재저사세포계중균유교강활성.
