生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2012年
1期
1-5
,共5页
张晓红%刘波%巩新%唱韶红%徐威%吴军
張曉紅%劉波%鞏新%唱韶紅%徐威%吳軍
장효홍%류파%공신%창소홍%서위%오군
H1N1流感病毒%血凝素%N-糖基化%糖基工程毕赤酵母
H1N1流感病毒%血凝素%N-糖基化%糖基工程畢赤酵母
H1N1류감병독%혈응소%N-당기화%당기공정필적효모
目的:建立用糖基工程酵母制备流感血凝素的方法,研究其免疫原性,为酵母表达流感疫苗提供基础.方法:通过PCR的方法扩增编码H1N1流感病毒血凝素HA1 (1～330 aa)的基因片段,将HA1基因克隆到表达载体pPIC9质粒上,电转化到糖基工程酵母中,甲醇诱导表达并用镍亲和层析柱纯化重组蛋白,N-糖苷酶F(PNGF)酶切分析N-糖链,Western印迹验证纯化蛋白,免疫小鼠并测定HA1诱导抗体的滴度.结果:获得HA1基因的酵母重组表达菌株,SDS-PAGE分析可见野生型GS115表达的重组HA1相对分子质量约为100×103,而糖基工程酵母GJK01表达的HA1约为60×103,PNGF酶切后相对分子质量均降至45×103左右；经Western印迹检测,这些条带均为目的蛋白条带,野生型和糖基工程酵母表达的HA1分子大小不同是由于不同的N-糖基化修饰引起的.重组HA1免疫小鼠可产生抗HA1抗体,随着抗原剂量的增加,其产生的抗体滴度相应增加；3次免疫后,4μg HA1诱导小鼠产生的抗体滴度最高.结论:利用糖基工程酵母表达制备了低糖化的流感病毒血凝素HA1,该重组蛋白可以诱导小鼠产生HA1抗体,且产生的抗体滴度具有HA1剂量依赖性.
目的:建立用糖基工程酵母製備流感血凝素的方法,研究其免疫原性,為酵母錶達流感疫苗提供基礎.方法:通過PCR的方法擴增編碼H1N1流感病毒血凝素HA1 (1～330 aa)的基因片段,將HA1基因剋隆到錶達載體pPIC9質粒上,電轉化到糖基工程酵母中,甲醇誘導錶達併用鎳親和層析柱純化重組蛋白,N-糖苷酶F(PNGF)酶切分析N-糖鏈,Western印跡驗證純化蛋白,免疫小鼠併測定HA1誘導抗體的滴度.結果:穫得HA1基因的酵母重組錶達菌株,SDS-PAGE分析可見野生型GS115錶達的重組HA1相對分子質量約為100×103,而糖基工程酵母GJK01錶達的HA1約為60×103,PNGF酶切後相對分子質量均降至45×103左右；經Western印跡檢測,這些條帶均為目的蛋白條帶,野生型和糖基工程酵母錶達的HA1分子大小不同是由于不同的N-糖基化脩飾引起的.重組HA1免疫小鼠可產生抗HA1抗體,隨著抗原劑量的增加,其產生的抗體滴度相應增加；3次免疫後,4μg HA1誘導小鼠產生的抗體滴度最高.結論:利用糖基工程酵母錶達製備瞭低糖化的流感病毒血凝素HA1,該重組蛋白可以誘導小鼠產生HA1抗體,且產生的抗體滴度具有HA1劑量依賴性.
목적:건립용당기공정효모제비류감혈응소적방법,연구기면역원성,위효모표체류감역묘제공기출.방법:통과PCR적방법확증편마H1N1류감병독혈응소HA1 (1～330 aa)적기인편단,장HA1기인극륭도표체재체pPIC9질립상,전전화도당기공정효모중,갑순유도표체병용얼친화층석주순화중조단백,N-당감매F(PNGF)매절분석N-당련,Western인적험증순화단백,면역소서병측정HA1유도항체적적도.결과:획득HA1기인적효모중조표체균주,SDS-PAGE분석가견야생형GS115표체적중조HA1상대분자질량약위100×103,이당기공정효모GJK01표체적HA1약위60×103,PNGF매절후상대분자질량균강지45×103좌우；경Western인적검측,저사조대균위목적단백조대,야생형화당기공정효모표체적HA1분자대소불동시유우불동적N-당기화수식인기적.중조HA1면역소서가산생항HA1항체,수착항원제량적증가,기산생적항체적도상응증가；3차면역후,4μg HA1유도소서산생적항체적도최고.결론:이용당기공정효모표체제비료저당화적류감병독혈응소HA1,해중조단백가이유도소서산생HA1항체,차산생적항체적도구유HA1제량의뢰성.
