CAJ | 학술논문

目的:获得高纯度、高活性的人TLR4 胞外段蛋白.方法:采用PCR方法从含人TLR4 cDNA的质粒pCDNA3-TLR4中扩增人TLR4 胞外段基因片段,将其插入载体pET32a并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达.用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白.SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的相对分子质量和抗原性,ELISA和FCM鉴定其功能活性.结果:获得1 911 bp 的人TLR4 胞外段基因片段,构建成重组表达载体pET32a-TLR4并在大肠杆菌中表达.TLR4-Trx融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的12%,其纯度较高.ELISA和FCM检测显示,TLR4-TrX融合蛋白不仅与配体LPS结合,还能竞争性抑制LPS与THP1细胞结合.结论:所获TLR4-Trx融合蛋白纯度高,功能活性好,为进一步研究TLR相关的免疫调节机制提供物质基础.
목적:획득고순도、고활성적인TLR4 포외단단백.방법:채용PCR방법종함인TLR4 cDNA적질립pCDNA3-TLR4중확증인TLR4 포외단기인편단,장기삽입재체pET32a병도입대장간균BL21(DE3)plysS중표체.용Ni2+-NTA경지당주순화융합단백.SDS-PAGE화면역인적분석목적단백적상대분자질량화항원성,ELISA화FCM감정기공능활성.결과:획득1 911 bp 적인TLR4 포외단기인편단,구건성중조표체재체pET32a-TLR4병재대장간균중표체.TLR4-Trx융합단백적표체량점균체총단백적12%,기순도교고.ELISA화FCM검측현시,TLR4-TrX융합단백불부여배체LPS결합,환능경쟁성억제LPS여THP1세포결합.결론:소획TLR4-Trx융합단백순도고,공능활성호,위진일보연구TLR상관적면역조절궤제제공물질기출.