中国医疗前沿（上半月）
中國醫療前沿（上半月）
중국의료전연（상반월）
CHINA HEALTHCARE INNOVATION
2008年
15期
3-5
,共3页
孙慎侠%张革%伦永志%王芳
孫慎俠%張革%倫永誌%王芳
손신협%장혁%륜영지%왕방
HCCR%RT-PCR%基因表达%多克隆抗体
HCCR%RT-PCR%基因錶達%多剋隆抗體
HCCR%RT-PCR%기인표체%다극륭항체
目的 构建人宫颈癌致癌基因HCCK-1167-360片段的重组质粒,在原核细胞中表达并鉴定.方法 从培养的人肝癌细胞株HepG2中提取总RNA,经RT-PCR扩增出HCCR-1167-360的cDNA片段,将其克隆到pGEM-T-Easy克隆载体中,将测序正确的HCCR-1167-360基因连接到pET30a(+)表达载体中,IPTG诱导在BL21中进行表达,用SDS-PAGE检测表达产物.采用初步纯化和割胶纯化方法 ,获得较纯的重组蛋白,采用弗氏佐剂方法 免疫兔子,收获多克隆抗体,用Wastern blot鉴定重组蛋白的免疫原性.结果 经测序证明获得了HCCR-1167-360基因片段.SDS-PAGE分析,HCCR-1167-360在BL21中获得表达,其相时分子质量为26 kD左右,主要以包涵体形式存在.免疫兔子获得了HCCK-1167-360多克隆抗体,经Wastern blot检测结果 表明获得了特异性的多克隆抗体.结论 获得具有抗原性的HCCR-1167-360原核表达蛋白.
目的 構建人宮頸癌緻癌基因HCCK-1167-360片段的重組質粒,在原覈細胞中錶達併鑒定.方法 從培養的人肝癌細胞株HepG2中提取總RNA,經RT-PCR擴增齣HCCR-1167-360的cDNA片段,將其剋隆到pGEM-T-Easy剋隆載體中,將測序正確的HCCR-1167-360基因連接到pET30a(+)錶達載體中,IPTG誘導在BL21中進行錶達,用SDS-PAGE檢測錶達產物.採用初步純化和割膠純化方法 ,穫得較純的重組蛋白,採用弗氏佐劑方法 免疫兔子,收穫多剋隆抗體,用Wastern blot鑒定重組蛋白的免疫原性.結果 經測序證明穫得瞭HCCR-1167-360基因片段.SDS-PAGE分析,HCCR-1167-360在BL21中穫得錶達,其相時分子質量為26 kD左右,主要以包涵體形式存在.免疫兔子穫得瞭HCCK-1167-360多剋隆抗體,經Wastern blot檢測結果 錶明穫得瞭特異性的多剋隆抗體.結論 穫得具有抗原性的HCCR-1167-360原覈錶達蛋白.
목적 구건인궁경암치암기인HCCK-1167-360편단적중조질립,재원핵세포중표체병감정.방법 종배양적인간암세포주HepG2중제취총RNA,경RT-PCR확증출HCCR-1167-360적cDNA편단,장기극륭도pGEM-T-Easy극륭재체중,장측서정학적HCCR-1167-360기인련접도pET30a(+)표체재체중,IPTG유도재BL21중진행표체,용SDS-PAGE검측표체산물.채용초보순화화할효순화방법 ,획득교순적중조단백,채용불씨좌제방법 면역토자,수획다극륭항체,용Wastern blot감정중조단백적면역원성.결과 경측서증명획득료HCCR-1167-360기인편단.SDS-PAGE분석,HCCR-1167-360재BL21중획득표체,기상시분자질량위26 kD좌우,주요이포함체형식존재.면역토자획득료HCCK-1167-360다극륭항체,경Wastern blot검측결과 표명획득료특이성적다극륭항체.결론 획득구유항원성적HCCR-1167-360원핵표체단백.
