生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
6期
155-159
,共5页
张怡%周庆峰%贾孟%张红绪%李成伟
張怡%週慶峰%賈孟%張紅緒%李成偉
장이%주경봉%가맹%장홍서%리성위
Exendin-4%融合蛋白%可溶表达%亲和纯化
Exendin-4%融閤蛋白%可溶錶達%親和純化
Exendin-4%융합단백%가용표체%친화순화
为了制备GST-Exendin-4融合蛋白,以本实验室构建好的pET22b-Exendin-4为模板,通过PCR扩增出Exendin-4基因,酶切克隆入pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4.经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在不同浓度的IPTG和不同温度诱导下,经SDS-PAGE分析鉴定,表达出Mr约为30 kD的目的蛋白,灰度扫描显示目的蛋白占菌体总蛋白的29.9%,超声裂解后的上清通过Sepharose 4B亲和层析纯化、透析、除盐及冷冻干燥得到高纯度的目的蛋白.本研究成功制备了高纯度的GST-Exendin-4融合蛋白,为下一步进行目的蛋白大规模的生产打下了良好的基础.
為瞭製備GST-Exendin-4融閤蛋白,以本實驗室構建好的pET22b-Exendin-4為模闆,通過PCR擴增齣Exendin-4基因,酶切剋隆入pGEX-4T-1,構建重組錶達質粒pGEX-4T-1-Exendin-4.經DNA測序證實插入序列與設計完全一緻後,將重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3),在不同濃度的IPTG和不同溫度誘導下,經SDS-PAGE分析鑒定,錶達齣Mr約為30 kD的目的蛋白,灰度掃描顯示目的蛋白佔菌體總蛋白的29.9%,超聲裂解後的上清通過Sepharose 4B親和層析純化、透析、除鹽及冷凍榦燥得到高純度的目的蛋白.本研究成功製備瞭高純度的GST-Exendin-4融閤蛋白,為下一步進行目的蛋白大規模的生產打下瞭良好的基礎.
위료제비GST-Exendin-4융합단백,이본실험실구건호적pET22b-Exendin-4위모판,통과PCR확증출Exendin-4기인,매절극륭입pGEX-4T-1,구건중조표체질립pGEX-4T-1-Exendin-4.경DNA측서증실삽입서렬여설계완전일치후,장중조질립전화대장간균BL21(DE3),재불동농도적IPTG화불동온도유도하,경SDS-PAGE분석감정,표체출Mr약위30 kD적목적단백,회도소묘현시목적단백점균체총단백적29.9%,초성렬해후적상청통과Sepharose 4B친화층석순화、투석、제염급냉동간조득도고순도적목적단백.본연구성공제비료고순도적GST-Exendin-4융합단백,위하일보진행목적단백대규모적생산타하료량호적기출.
