激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2010年
3期
339-346
,共8页
郭俣%刘长青%陆涛峰%包阿东%刘帅%关伟军%马月辉
郭俁%劉長青%陸濤峰%包阿東%劉帥%關偉軍%馬月輝
곽오%류장청%륙도봉%포아동%류수%관위군%마월휘
北京油鸡%purH基因%荧光蛋白%成纤维细胞%基因表达
北京油鷄%purH基因%熒光蛋白%成纖維細胞%基因錶達
북경유계%purH기인%형광단백%성섬유세포%기인표체
提取北京油鸡8种组织的总RNA,利用RT-PCR检测purH基因mRNA的差异表达.将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-purH,利用脂质体介导法将其导入北京油鸡体外培养细胞中,进行G418药物筛选和克隆化培养.结果表明:北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506)编码区为1 782 bp,编码593 aa的多肽,转染后24 h、48 h和72 h,pEGFP-purH转染率在10.3%～53.2%之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状.经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-purH融合蛋白的克隆细胞株,RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-purH已整合到北京油鸡成纤维细胞基因组中,在优化的条件下,阳性细胞凋亡率、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P＞0.05).
提取北京油鷄8種組織的總RNA,利用RT-PCR檢測purH基因mRNA的差異錶達.將purH基因完整開放閱讀框定嚮插入pEGFP-N3,構建帶有GFP報告基因重組錶達載體pEGFP-purH,利用脂質體介導法將其導入北京油鷄體外培養細胞中,進行G418藥物篩選和剋隆化培養.結果錶明:北京油鷄purH基因(GenBank登錄號:EU334506)編碼區為1 782 bp,編碼593 aa的多肽,轉染後24 h、48 h和72 h,pEGFP-purH轉染率在10.3%～53.2%之間,綠色熒光均勻分佈于細胞質與細胞覈中,隨錶達量的增加,綠色熒光在細胞覈中聚集成糰塊狀或顆粒狀.經藥物篩選和剋隆化培養,穫得錶達pEGFP-purH融閤蛋白的剋隆細胞株,RT-PCR與Western blotting檢測確認pEGFP-purH已整閤到北京油鷄成纖維細胞基因組中,在優化的條件下,暘性細胞凋亡率、生長與增殖狀況與對照組比較差異不顯著(P＞0.05).
제취북경유계8충조직적총RNA,이용RT-PCR검측purH기인mRNA적차이표체.장purH기인완정개방열독광정향삽입pEGFP-N3,구건대유GFP보고기인중조표체재체pEGFP-purH,이용지질체개도법장기도입북경유계체외배양세포중,진행G418약물사선화극륭화배양.결과표명:북경유계purH기인(GenBank등록호:EU334506)편마구위1 782 bp,편마593 aa적다태,전염후24 h、48 h화72 h,pEGFP-purH전염솔재10.3%～53.2%지간,록색형광균균분포우세포질여세포핵중,수표체량적증가,록색형광재세포핵중취집성단괴상혹과립상.경약물사선화극륭화배양,획득표체pEGFP-purH융합단백적극륭세포주,RT-PCR여Western blotting검측학인pEGFP-purH이정합도북경유계성섬유세포기인조중,재우화적조건하,양성세포조망솔、생장여증식상황여대조조비교차이불현저(P＞0.05).
