基因组学与应用生物学
基因組學與應用生物學
기인조학여응용생물학
GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
2009年
3期
450-454
,共5页
刘丹%郭兆奎%万秀清%颜培强%乔婵%刘磊
劉丹%郭兆奎%萬秀清%顏培彊%喬嬋%劉磊
류단%곽조규%만수청%안배강%교선%류뢰
TMV和PVY双基因融合%RNA干涉%转化烟草
TMV和PVY雙基因融閤%RNA榦涉%轉化煙草
TMV화PVY쌍기인융합%RNA간섭%전화연초
为了降低烟草花叶病毒(fobacco mosaic virus,TMV)和马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)复合侵染对烟草带来的危害,本实验找到TMV-CP和PVY-CP基因部分保守序列,将保守序列进行双基因融合,此双基因即为RNAi的靶序列,用限制性内切酶将双基因从pMD18-T载体上切下,正反向连接到pUCCRNAi载体后,经酶切鉴定后定向连接到含超强启动子的pC2300-35S-OCS表达载体上,利用冻融法将此表达载体导入只含辅助质粒的根癌农杆菌中,构建含靶序列反向重复结构的RNAi双元载体系统,提取转化质粒,经酶切验证鉴定表明TMV和PVY外壳蛋白基因植物表达双元载体构建成功.并转化烟草,获得了3株对TMV和PVY抗性显著提高的转基因烟草.
為瞭降低煙草花葉病毒(fobacco mosaic virus,TMV)和馬鈴藷Y病毒(potato virus Y,PVY)複閤侵染對煙草帶來的危害,本實驗找到TMV-CP和PVY-CP基因部分保守序列,將保守序列進行雙基因融閤,此雙基因即為RNAi的靶序列,用限製性內切酶將雙基因從pMD18-T載體上切下,正反嚮連接到pUCCRNAi載體後,經酶切鑒定後定嚮連接到含超彊啟動子的pC2300-35S-OCS錶達載體上,利用凍融法將此錶達載體導入隻含輔助質粒的根癌農桿菌中,構建含靶序列反嚮重複結構的RNAi雙元載體繫統,提取轉化質粒,經酶切驗證鑒定錶明TMV和PVY外殼蛋白基因植物錶達雙元載體構建成功.併轉化煙草,穫得瞭3株對TMV和PVY抗性顯著提高的轉基因煙草.
위료강저연초화협병독(fobacco mosaic virus,TMV)화마령서Y병독(potato virus Y,PVY)복합침염대연초대래적위해,본실험조도TMV-CP화PVY-CP기인부분보수서렬,장보수서렬진행쌍기인융합,차쌍기인즉위RNAi적파서렬,용한제성내절매장쌍기인종pMD18-T재체상절하,정반향련접도pUCCRNAi재체후,경매절감정후정향련접도함초강계동자적pC2300-35S-OCS표체재체상,이용동융법장차표체재체도입지함보조질립적근암농간균중,구건함파서렬반향중복결구적RNAi쌍원재체계통,제취전화질립,경매절험증감정표명TMV화PVY외각단백기인식물표체쌍원재체구건성공.병전화연초,획득료3주대TMV화PVY항성현저제고적전기인연초.
