CAJ | 학술논문

为快速鉴定不同新城疫病毒株(NDV)毒力,我们以NDV F蛋白裂解位点附近的基因序列自行设计1对引物,对不同毒力NDV毒株进行荧光RT-PCR扩增,根据其扩增效率及扩增产物熔解温度(Tm)值大小进行NDV毒株毒力的鉴定,建立了能区分NDV强弱毒株的SYBR Green I荧光RT-PCR方法;同时将其与鸡胚平均致死时间(MDT)测定和F蛋白裂解位点序列分析结果进行比较.结果发现:建立的SYBR Green I 荧光RT-PCR方法只需4 h即可判定结果,NDV强弱毒株扩增产物Tm值为(83±0.5)℃且有2个峰值,阴性对照Tm值为(81±O.5)℃且只有1个峰值;对NDV强毒株的扩增效率即Ct值在11-20之间,NDV弱毒株Ct值在25-30之间,阴性对照Ct值在30以上,Ct值在20-25之间为强弱毒株混合物.该方法检测结果与MDT测定和F蛋白裂解位点分析结果一致.应用SYBR Green I模式荧光RT-PCR方法与普通RT-PCR方法和鸡胚接种鉴定方法分别对80份临床组织样品进行检测,强毒株的检出率均为53.75%(43/80),而弱毒株的检出率相应为31.25%(25/80)、27.50%(22/80)和35.00%(28/80),检出符合率达89.3%以上.这些结果表明建立的SYBR Green I荧光RT-PCR方法具有特异、准确、快速等特点,可用于临床病料样本NDV毒株的毒力鉴定.
위쾌속감정불동신성역병독주(NDV)독력,아문이NDV F단백렬해위점부근적기인서렬자행설계1대인물,대불동독력NDV독주진행형광RT-PCR확증,근거기확증효솔급확증산물용해온도(Tm)치대소진행NDV독주독력적감정,건립료능구분NDV강약독주적SYBR Green I형광RT-PCR방법;동시장기여계배평균치사시간(MDT)측정화F단백렬해위점서렬분석결과진행비교.결과발현:건립적SYBR Green I 형광RT-PCR방법지수4 h즉가판정결과,NDV강약독주확증산물Tm치위(83±0.5)℃차유2개봉치,음성대조Tm치위(81±O.5)℃차지유1개봉치;대NDV강독주적확증효솔즉Ct치재11-20지간,NDV약독주Ct치재25-30지간,음성대조Ct치재30이상,Ct치재20-25지간위강약독주혼합물.해방법검측결과여MDT측정화F단백렬해위점분석결과일치.응용SYBR Green I모식형광RT-PCR방법여보통RT-PCR방법화계배접충감정방법분별대80빈림상조직양품진행검측,강독주적검출솔균위53.75%(43/80),이약독주적검출솔상응위31.25%(25/80)、27.50%(22/80)화35.00%(28/80),검출부합솔체89.3%이상.저사결과표명건립적SYBR Green I형광RT-PCR방법구유특이、준학、쾌속등특점,가용우림상병료양본NDV독주적독력감정.