CAJ | 학술논문

目的优化沙门菌基因间共有重复序列-PCR(ERIC-PCR)分子分型方法,分析沙门菌标准菌株及流行分离株基因组DNA ERIC-PCR指纹图谱.方法提取鼠伤寒沙门菌基因组DNA作为模板,根据ERIC核心片段设计引物,运用ERIC-PCR技术扩增沙门菌基因组中的靶序列,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后用凝胶成像分析仪对图谱进行观察分析.反应体系中模板量、Mg2+浓度、引物浓度和退火温度的优化实验则采用对优化项目设置梯度、其它条件不变的方法进行.以优化好的ERIC-PCR方法对16株沙门菌及1株大肠杆菌进行分析.结果在总体积为25μl的反应体系中,选择DNA模板量为lOOng/25μl,Mg2浓度为2.0mmol/L,引物ERIC1R、ERIC2浓度分别为0.4tμmol/L,退火温度为52℃时,扩增产物的电泳图谱条带最清晰完整.不同血清群、型和来源的沙门菌株间基因组DNA ERIC-PCR指纹图谱带型差异较大,可在250～5000bp范围内出现3～13条条带,并在250bp处出现一条特征条带.结论优化了沙门菌ERIC-PCR的重要反应条件.ERIC-PCR法能区分不同来源的沙门菌,可用于沙门菌病的流行病学调查和同源性追踪,弥补传统分型方法的不足.
목적 우화사문균기인간공유중복서렬-PCR(ERIC-PCR)분자분형방법,분석사문균표준균주급류행분리주기인조DNA ERIC-PCR지문도보.방법 제취서상한사문균기인조DNA작위모판,근거ERIC핵심편단설계인물,운용ERIC-PCR기술확증사문균기인조중적파서렬,PCR산물경경지당응효전영후용응효성상분석의대도보진행관찰분석.반응체계중모판량、Mg2+농도、인물농도화퇴화온도적우화실험칙채용대우화항목설치제도、기타조건불변적방법진행.이우화호적ERIC-PCR방법대16주사문균급1주대장간균진행분석.결과 재총체적위25μl적반응체계중,선택DNA모판량위lOOng/25μl,Mg2농도위2.0mmol/L,인물ERIC1R、ERIC2농도분별위0.4tμmol/L,퇴화온도위52℃시,확증산물적전영도보조대최청석완정.불동혈청군、형화래원적사문균주간기인조DNA ERIC-PCR지문도보대형차이교대,가재250～5000bp범위내출현3～13조조대,병재250bp처출현일조특정조대.결론 우화료사문균ERIC-PCR적중요반응조건.ERIC-PCR법능구분불동래원적사문균,가용우사문균병적류행병학조사화동원성추종,미보전통분형방법적불족.