中国实用医药
中國實用醫藥
중국실용의약
CHINA PRACTICAL MEDICAL
2008年
18期
4-6
,共3页
叶鹏%李著华%杨彦彪%王树人
葉鵬%李著華%楊彥彪%王樹人
협붕%리저화%양언표%왕수인
双歧杆菌%自杀基因%CD基因%UPRT基因%肿瘤靶向性
雙歧桿菌%自殺基因%CD基因%UPRT基因%腫瘤靶嚮性
쌍기간균%자살기인%CD기인%UPRT기인%종류파향성
目的 利用婴儿双歧杆菌对实体瘤低氧区的靶向效应,构建肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pH2/CD和pH2/UPRT.方法 用PCR的方法从质粒pGEX/CD和pGEX/UPRT中扩增出CD基因和UPRT基因,用内切酶BamH I和Sal I酶切CD基因,UPRT基因和质粒pH2,分别连接后重组于大肠杆菌中.用电转化的方法将重组质粒转入婴儿双歧杆菌中.通过双酶切和基因测序的方法检验质粒pH2/CD和pH2/UPRT的正确性,RT-PCR检测该系统的mRNA表达.在黑色素瘤B16-F10细胞上检测该系统的体外肿瘤细胞杀伤效果.结果 成功地将CD基因和UPRT基因转入了乳酸菌表达质粒pH2,在纯化后的质粒被双酶切后,CD基因被分割为6 9 kb和1 3 kb的两部分,UPRT基因被分割为6 9 kb和620 bp的两部分.CD基因和UPRT基因的测序结果表明序列与Genebank公布的序列一致.RT-PCR检测到CD和UPRT mRNA的明显表达.黑色素瘤细胞的低存活率证明pH2/CD,pH2/UPRT自杀基因治疗系统对黑色素瘤的强大杀伤作用.结论 肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pH2/CD,pH2/UPRT构建成功并显示出强大的杀伤肿瘤细胞的作用.
目的 利用嬰兒雙歧桿菌對實體瘤低氧區的靶嚮效應,構建腫瘤厭氧靶嚮雙自殺基因治療繫統pH2/CD和pH2/UPRT.方法 用PCR的方法從質粒pGEX/CD和pGEX/UPRT中擴增齣CD基因和UPRT基因,用內切酶BamH I和Sal I酶切CD基因,UPRT基因和質粒pH2,分彆連接後重組于大腸桿菌中.用電轉化的方法將重組質粒轉入嬰兒雙歧桿菌中.通過雙酶切和基因測序的方法檢驗質粒pH2/CD和pH2/UPRT的正確性,RT-PCR檢測該繫統的mRNA錶達.在黑色素瘤B16-F10細胞上檢測該繫統的體外腫瘤細胞殺傷效果.結果 成功地將CD基因和UPRT基因轉入瞭乳痠菌錶達質粒pH2,在純化後的質粒被雙酶切後,CD基因被分割為6 9 kb和1 3 kb的兩部分,UPRT基因被分割為6 9 kb和620 bp的兩部分.CD基因和UPRT基因的測序結果錶明序列與Genebank公佈的序列一緻.RT-PCR檢測到CD和UPRT mRNA的明顯錶達.黑色素瘤細胞的低存活率證明pH2/CD,pH2/UPRT自殺基因治療繫統對黑色素瘤的彊大殺傷作用.結論 腫瘤厭氧靶嚮雙自殺基因治療繫統pH2/CD,pH2/UPRT構建成功併顯示齣彊大的殺傷腫瘤細胞的作用.
목적 이용영인쌍기간균대실체류저양구적파향효응,구건종류염양파향쌍자살기인치료계통pH2/CD화pH2/UPRT.방법 용PCR적방법종질립pGEX/CD화pGEX/UPRT중확증출CD기인화UPRT기인,용내절매BamH I화Sal I매절CD기인,UPRT기인화질립pH2,분별련접후중조우대장간균중.용전전화적방법장중조질립전입영인쌍기간균중.통과쌍매절화기인측서적방법검험질립pH2/CD화pH2/UPRT적정학성,RT-PCR검측해계통적mRNA표체.재흑색소류B16-F10세포상검측해계통적체외종류세포살상효과.결과 성공지장CD기인화UPRT기인전입료유산균표체질립pH2,재순화후적질립피쌍매절후,CD기인피분할위6 9 kb화1 3 kb적량부분,UPRT기인피분할위6 9 kb화620 bp적량부분.CD기인화UPRT기인적측서결과표명서렬여Genebank공포적서렬일치.RT-PCR검측도CD화UPRT mRNA적명현표체.흑색소류세포적저존활솔증명pH2/CD,pH2/UPRT자살기인치료계통대흑색소류적강대살상작용.결론 종류염양파향쌍자살기인치료계통pH2/CD,pH2/UPRT구건성공병현시출강대적살상종류세포적작용.
