细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
2期
126-129
,共4页
刘艳菲%林志娟%冯永堂%许传武%史琳%苗乃法
劉豔菲%林誌娟%馮永堂%許傳武%史琳%苗迺法
류염비%림지연%풍영당%허전무%사림%묘내법
OX40%mOX40-Ig%CHO细胞%真核表达
OX40%mOX40-Ig%CHO細胞%真覈錶達
OX40%mOX40-Ig%CHO세포%진핵표체
目的:构建pcDNA3.1-mOX40-Ig真核表达载体,转染CHO细胞进行稳定表达,获得有生物学活性的mOX40-Ig融合蛋白.方法:RT-PCR法扩增获得hIgG1Fc段基因,构建pcDNA3.1-hIgG1Fc重组质粒并经测序证实.从本室保存的pIRES2-EGFP-mOX40重组质粒中PCR扩增mOX40胞外段,将其插入pcDNA3.1-hIgG1Fc重组质粒中构建pcDNA3.1-mOX40-Ig真核表达载体.脂质体法转染CHO细胞获得稳定表达,用RT-PCR与ELISA法检测其表达,蛋白A亲和纯化后,SDS-PAGE进行鉴定.3H-TdR掺入法研究OX40信号对B细胞的体外促增殖作用.结果:测序证实hIgG1Fc段、mOX40胞外段及mOX40-Ig基因序列正确,RT-PCR与ELISA证实mOX40-Ig的表达,SDS-PAGE证实其为mOX40-Ig融合蛋白,3H-TdR掺入法显示mOX40-Ig在体外能有效地促进B细胞增殖.结论:成功地构建pcDNA3.1-mOX40-Ig真核表达载体,并获得有生物学活性的mOX40-Ig融合蛋白的稳定表达,为进一步开展OX40相关领域的横向应用研究奠定了基础.
目的:構建pcDNA3.1-mOX40-Ig真覈錶達載體,轉染CHO細胞進行穩定錶達,穫得有生物學活性的mOX40-Ig融閤蛋白.方法:RT-PCR法擴增穫得hIgG1Fc段基因,構建pcDNA3.1-hIgG1Fc重組質粒併經測序證實.從本室保存的pIRES2-EGFP-mOX40重組質粒中PCR擴增mOX40胞外段,將其插入pcDNA3.1-hIgG1Fc重組質粒中構建pcDNA3.1-mOX40-Ig真覈錶達載體.脂質體法轉染CHO細胞穫得穩定錶達,用RT-PCR與ELISA法檢測其錶達,蛋白A親和純化後,SDS-PAGE進行鑒定.3H-TdR摻入法研究OX40信號對B細胞的體外促增殖作用.結果:測序證實hIgG1Fc段、mOX40胞外段及mOX40-Ig基因序列正確,RT-PCR與ELISA證實mOX40-Ig的錶達,SDS-PAGE證實其為mOX40-Ig融閤蛋白,3H-TdR摻入法顯示mOX40-Ig在體外能有效地促進B細胞增殖.結論:成功地構建pcDNA3.1-mOX40-Ig真覈錶達載體,併穫得有生物學活性的mOX40-Ig融閤蛋白的穩定錶達,為進一步開展OX40相關領域的橫嚮應用研究奠定瞭基礎.
목적:구건pcDNA3.1-mOX40-Ig진핵표체재체,전염CHO세포진행은정표체,획득유생물학활성적mOX40-Ig융합단백.방법:RT-PCR법확증획득hIgG1Fc단기인,구건pcDNA3.1-hIgG1Fc중조질립병경측서증실.종본실보존적pIRES2-EGFP-mOX40중조질립중PCR확증mOX40포외단,장기삽입pcDNA3.1-hIgG1Fc중조질립중구건pcDNA3.1-mOX40-Ig진핵표체재체.지질체법전염CHO세포획득은정표체,용RT-PCR여ELISA법검측기표체,단백A친화순화후,SDS-PAGE진행감정.3H-TdR참입법연구OX40신호대B세포적체외촉증식작용.결과:측서증실hIgG1Fc단、mOX40포외단급mOX40-Ig기인서렬정학,RT-PCR여ELISA증실mOX40-Ig적표체,SDS-PAGE증실기위mOX40-Ig융합단백,3H-TdR참입법현시mOX40-Ig재체외능유효지촉진B세포증식.결론:성공지구건pcDNA3.1-mOX40-Ig진핵표체재체,병획득유생물학활성적mOX40-Ig융합단백적은정표체,위진일보개전OX40상관영역적횡향응용연구전정료기출.
