CAJ | 학술논문

以伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA为模板,通过PCR扩增UL6全长基因,将PCR产物克隆于pMD18-T载体,并采用双脱氧终止法进行序列测定.序列分析显示UL6全长1 938 bp,可编码646个氨基酸.将该基因克隆到插入原核表达载体pET28a的6×His下游,获得原核表达质粒pET28a-UL6,转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导在大肠埃希菌中成功表达获得分子质量约70 ku的融合表达蛋白6×His-UL6,Western blot证实,表达的融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生特异性反应.根据测定的序列,设计一对能扩增UL6基因完整编码区的引物,PCR扩增UL6基因并将其插入真核表达载体pEGFP-C2中EGFP基因的3'端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL6,转染Hela细胞,通过激光共聚焦显微镜观察发现,转染48 h,融合蛋白EGFP-UL6主要定位在胞浆,为进一步研究伪狂犬病病毒Ea株UL6基因的结构和功能奠定了基础.
이위광견병병독Ea주기인조DNA위모판,통과PCR확증UL6전장기인,장PCR산물극륭우pMD18-T재체,병채용쌍탈양종지법진행서렬측정.서렬분석현시UL6전장1 938 bp,가편마646개안기산.장해기인극륭도삽입원핵표체재체pET28a적6×His하유,획득원핵표체질립pET28a-UL6,전화대장애희균BL21,경IPTG유도재대장애희균중성공표체획득분자질량약70 ku적융합표체단백6×His-UL6,Western blot증실,표체적융합단백능여항6×His적단극륭항체발생특이성반응.근거측정적서렬,설계일대능확증UL6기인완정편마구적인물,PCR확증UL6기인병장기삽입진핵표체재체pEGFP-C2중EGFP기인적3'단,획득여EGFP융합표체적진핵표체질립pEGFP-UL6,전염Hela세포,통과격광공취초현미경관찰발현,전염48 h,융합단백EGFP-UL6주요정위재포장,위진일보연구위광견병병독Ea주UL6기인적결구화공능전정료기출.