中国卫生检验杂志
中國衛生檢驗雜誌
중국위생검험잡지
CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY
2007年
11期
1959-1962
,共4页
多重PCR%食品检验%肠毒性大肠埃希菌%伤寒沙门菌%福氏志贺菌
多重PCR%食品檢驗%腸毒性大腸埃希菌%傷寒沙門菌%福氏誌賀菌
다중PCR%식품검험%장독성대장애희균%상한사문균%복씨지하균
目的:建立快速检测食源性致病菌的多重PCR方法.方法:本研究根据肠毒性大肠埃希菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)的大肠杆菌不耐热毒素(Heat labileenterotoxin,LT)的B亚单位(LTB)、伤寒沙门菌(Salmonella typhi)的侵袭蛋白A(invasion protein A,invA)、福氏志贸菌(Shigella flexneri)侵袭性质粒抗原H基因(invasion plasmid antigen H,ipaH),分别设计了三对引物,预计PCR扩增的目的基因片段为194、279和435 bp.对单个基因PCR和单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及建立L16(43)正交试验对单管多重PCR扩增条件如引物浓度、dNTP浓度和Tm值等的优化,建立了快速检测肠毒性大肠埃希菌、伤寒沙门菌和福氏志贺菌的稳定的单管多重PCR方法.结果:该方法检测的灵敏度分别为:145 pg/ml肠毒性大肠埃希菌的基因组DNA、100 ng/ml伤寒沙门菌的基因组DNA、7 ng/ml福氏志贺菌的基因组DNA,与单基因PCR检测的灵敏度相同.并且模拟检测食品中的细菌,结果很稳定.结论:该方法操作简单、检验周期短、特异性和灵敏度高,能够快速地实现对食品中的多种致病菌的诊检和监控.
目的:建立快速檢測食源性緻病菌的多重PCR方法.方法:本研究根據腸毒性大腸埃希菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)的大腸桿菌不耐熱毒素(Heat labileenterotoxin,LT)的B亞單位(LTB)、傷寒沙門菌(Salmonella typhi)的侵襲蛋白A(invasion protein A,invA)、福氏誌貿菌(Shigella flexneri)侵襲性質粒抗原H基因(invasion plasmid antigen H,ipaH),分彆設計瞭三對引物,預計PCR擴增的目的基因片段為194、279和435 bp.對單箇基因PCR和單管多重PCR擴增的特異性、敏感性分析以及建立L16(43)正交試驗對單管多重PCR擴增條件如引物濃度、dNTP濃度和Tm值等的優化,建立瞭快速檢測腸毒性大腸埃希菌、傷寒沙門菌和福氏誌賀菌的穩定的單管多重PCR方法.結果:該方法檢測的靈敏度分彆為:145 pg/ml腸毒性大腸埃希菌的基因組DNA、100 ng/ml傷寒沙門菌的基因組DNA、7 ng/ml福氏誌賀菌的基因組DNA,與單基因PCR檢測的靈敏度相同.併且模擬檢測食品中的細菌,結果很穩定.結論:該方法操作簡單、檢驗週期短、特異性和靈敏度高,能夠快速地實現對食品中的多種緻病菌的診檢和鑑控.
목적:건립쾌속검측식원성치병균적다중PCR방법.방법:본연구근거장독성대장애희균(enterotoxigenic E.coli,ETEC)적대장간균불내열독소(Heat labileenterotoxin,LT)적B아단위(LTB)、상한사문균(Salmonella typhi)적침습단백A(invasion protein A,invA)、복씨지무균(Shigella flexneri)침습성질립항원H기인(invasion plasmid antigen H,ipaH),분별설계료삼대인물,예계PCR확증적목적기인편단위194、279화435 bp.대단개기인PCR화단관다중PCR확증적특이성、민감성분석이급건립L16(43)정교시험대단관다중PCR확증조건여인물농도、dNTP농도화Tm치등적우화,건립료쾌속검측장독성대장애희균、상한사문균화복씨지하균적은정적단관다중PCR방법.결과:해방법검측적령민도분별위:145 pg/ml장독성대장애희균적기인조DNA、100 ng/ml상한사문균적기인조DNA、7 ng/ml복씨지하균적기인조DNA,여단기인PCR검측적령민도상동.병차모의검측식품중적세균,결과흔은정.결론:해방법조작간단、검험주기단、특이성화령민도고,능구쾌속지실현대식품중적다충치병균적진검화감공.
