解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2007年
6期
768-770
,共3页
孟书聪%张君%张小燕%陆爱丽
孟書聰%張君%張小燕%陸愛麗
맹서총%장군%장소연%륙애려
视网膜色素上皮细胞%细胞凋亡%细胞保护液%流式细胞术
視網膜色素上皮細胞%細胞凋亡%細胞保護液%流式細胞術
시망막색소상피세포%세포조망%세포보호액%류식세포술
目的 研究人视网膜色素上皮细胞(hRPE细胞)离体或脱离体外培养条件后,维持细胞活性、且延长细胞存活时间最适宜的液体.方法 将5代以上hRPE细胞(本实验室保存)按常规冷冻、复苏培养于DMEM/F12培养基添加10%胎牛血清, EGF 20μg/L 和 bFGF 20μg/L条件下,至80%以上汇合,经胰蛋白酶消化,收集细胞、计数,置于6种不同保存液中(平衡盐液、Quinn's advantage medium、生理盐水、18氨基酸液、5%葡萄糖液和人工脑脊液),用Annexin V/FITC Kit染色,利用流式细胞术(FACS)检测细胞死亡或凋亡.采用2h至8h之间3个时间点,检测hRPE细胞在6种不同细胞保存液中的细胞状态.结果 室温状态下,hRPE细胞30min内均发生坏死.4℃状态下,2h平衡盐液组凋亡率最低(0.9%);各组分别与平衡盐液组相比,显示人工脑脊液组与平衡盐液组之间存在显著差异;4h至8h,hRPE细胞凋亡率从26.74%上升至41.36%.各组总死亡率与凋亡率基本一致.结论 4℃状态下,6种溶液中,平衡盐液是维持hRPE细胞脱离培养条件后保持细胞活性,且延长细胞存活时间最适宜的溶液.
目的 研究人視網膜色素上皮細胞(hRPE細胞)離體或脫離體外培養條件後,維持細胞活性、且延長細胞存活時間最適宜的液體.方法 將5代以上hRPE細胞(本實驗室保存)按常規冷凍、複囌培養于DMEM/F12培養基添加10%胎牛血清, EGF 20μg/L 和 bFGF 20μg/L條件下,至80%以上彙閤,經胰蛋白酶消化,收集細胞、計數,置于6種不同保存液中(平衡鹽液、Quinn's advantage medium、生理鹽水、18氨基痠液、5%葡萄糖液和人工腦脊液),用Annexin V/FITC Kit染色,利用流式細胞術(FACS)檢測細胞死亡或凋亡.採用2h至8h之間3箇時間點,檢測hRPE細胞在6種不同細胞保存液中的細胞狀態.結果 室溫狀態下,hRPE細胞30min內均髮生壞死.4℃狀態下,2h平衡鹽液組凋亡率最低(0.9%);各組分彆與平衡鹽液組相比,顯示人工腦脊液組與平衡鹽液組之間存在顯著差異;4h至8h,hRPE細胞凋亡率從26.74%上升至41.36%.各組總死亡率與凋亡率基本一緻.結論 4℃狀態下,6種溶液中,平衡鹽液是維持hRPE細胞脫離培養條件後保持細胞活性,且延長細胞存活時間最適宜的溶液.
목적 연구인시망막색소상피세포(hRPE세포)리체혹탈리체외배양조건후,유지세포활성、차연장세포존활시간최괄의적액체.방법 장5대이상hRPE세포(본실험실보존)안상규냉동、복소배양우DMEM/F12배양기첨가10%태우혈청, EGF 20μg/L 화 bFGF 20μg/L조건하,지80%이상회합,경이단백매소화,수집세포、계수,치우6충불동보존액중(평형염액、Quinn's advantage medium、생리염수、18안기산액、5%포도당액화인공뇌척액),용Annexin V/FITC Kit염색,이용류식세포술(FACS)검측세포사망혹조망.채용2h지8h지간3개시간점,검측hRPE세포재6충불동세포보존액중적세포상태.결과 실온상태하,hRPE세포30min내균발생배사.4℃상태하,2h평형염액조조망솔최저(0.9%);각조분별여평형염액조상비,현시인공뇌척액조여평형염액조지간존재현저차이;4h지8h,hRPE세포조망솔종26.74%상승지41.36%.각조총사망솔여조망솔기본일치.결론 4℃상태하,6충용액중,평형염액시유지hRPE세포탈리배양조건후보지세포활성,차연장세포존활시간최괄의적용액.
