武汉大学学报(医学版)
武漢大學學報(醫學版)
무한대학학보(의학판)
MEDICAL JOURNAL WUHAN UNIVERSITY
2007年
6期
693-697
,共5页
王清秀%杨镭镭%钟和英%彭成为%王家宁%马大青
王清秀%楊鐳鐳%鐘和英%彭成為%王傢寧%馬大青
왕청수%양뢰뢰%종화영%팽성위%왕가저%마대청
重组腺病毒%基因%人β神经生长因子%星形胶质细胞%感染%表达
重組腺病毒%基因%人β神經生長因子%星形膠質細胞%感染%錶達
중조선병독%기인%인β신경생장인자%성형효질세포%감염%표체
目的:体外培养新生SD大鼠脊髓星形胶质细胞,观察携带人β神经生长因子基因的重组腺病毒(Ad-hNGFβ)对其存活及毒性作用,为Ad-hNGFβ在体研究打下基础.方法:分离新生SD大鼠的脊髓星形胶质细胞(Astrocyte, Ast),应用DMEM/F-12 1:1培养基进行原代培养扩增鉴定.重组Ad-hNGFβ(MOI=25,50,100)转染Ast后, 噻唑蓝(MTT)法检测病毒感染滴度与细胞存活的关系.ELISA方法测定培养3,6,9,12,15 d时培养上清中hNGFβ的含量;用流式细胞仪对转染细胞进行倍体分析,观察转染Ad-hNGFβ对细胞周期和凋亡的影响;Western blot印迹法测定转染后表达产物的存在形式.结果:从新生SD大鼠的脊髓组织中成功分离培养出星形胶质细胞,GFAP免疫荧光阳性.经MTT法测定,当MOI=25,50,100时试验组的吸光值OD490与对照组比无显著差异,P>0.05.转染Ad-hNGFβ后试验组细胞培养上清中hNGFβ表达量与对照组同期相比有显著差异,P<0.01;且hNGFβ可持续表达至15 d.Ad-hNGFβ转染细胞后所表达的活性产物以hNGFβ二聚体的形式存在.流式细胞仪测得细胞增殖指数与对照组比明显升高,P<0.01.结论:Ad-hNGFβ可有效介导hNGFβ基因转染原代培养的脊髓星形胶质细胞,并且成功表达有活性的hNGFβ,增加细胞活性.
目的:體外培養新生SD大鼠脊髓星形膠質細胞,觀察攜帶人β神經生長因子基因的重組腺病毒(Ad-hNGFβ)對其存活及毒性作用,為Ad-hNGFβ在體研究打下基礎.方法:分離新生SD大鼠的脊髓星形膠質細胞(Astrocyte, Ast),應用DMEM/F-12 1:1培養基進行原代培養擴增鑒定.重組Ad-hNGFβ(MOI=25,50,100)轉染Ast後, 噻唑藍(MTT)法檢測病毒感染滴度與細胞存活的關繫.ELISA方法測定培養3,6,9,12,15 d時培養上清中hNGFβ的含量;用流式細胞儀對轉染細胞進行倍體分析,觀察轉染Ad-hNGFβ對細胞週期和凋亡的影響;Western blot印跡法測定轉染後錶達產物的存在形式.結果:從新生SD大鼠的脊髓組織中成功分離培養齣星形膠質細胞,GFAP免疫熒光暘性.經MTT法測定,噹MOI=25,50,100時試驗組的吸光值OD490與對照組比無顯著差異,P>0.05.轉染Ad-hNGFβ後試驗組細胞培養上清中hNGFβ錶達量與對照組同期相比有顯著差異,P<0.01;且hNGFβ可持續錶達至15 d.Ad-hNGFβ轉染細胞後所錶達的活性產物以hNGFβ二聚體的形式存在.流式細胞儀測得細胞增殖指數與對照組比明顯升高,P<0.01.結論:Ad-hNGFβ可有效介導hNGFβ基因轉染原代培養的脊髓星形膠質細胞,併且成功錶達有活性的hNGFβ,增加細胞活性.
목적:체외배양신생SD대서척수성형효질세포,관찰휴대인β신경생장인자기인적중조선병독(Ad-hNGFβ)대기존활급독성작용,위Ad-hNGFβ재체연구타하기출.방법:분리신생SD대서적척수성형효질세포(Astrocyte, Ast),응용DMEM/F-12 1:1배양기진행원대배양확증감정.중조Ad-hNGFβ(MOI=25,50,100)전염Ast후, 새서람(MTT)법검측병독감염적도여세포존활적관계.ELISA방법측정배양3,6,9,12,15 d시배양상청중hNGFβ적함량;용류식세포의대전염세포진행배체분석,관찰전염Ad-hNGFβ대세포주기화조망적영향;Western blot인적법측정전염후표체산물적존재형식.결과:종신생SD대서적척수조직중성공분리배양출성형효질세포,GFAP면역형광양성.경MTT법측정,당MOI=25,50,100시시험조적흡광치OD490여대조조비무현저차이,P>0.05.전염Ad-hNGFβ후시험조세포배양상청중hNGFβ표체량여대조조동기상비유현저차이,P<0.01;차hNGFβ가지속표체지15 d.Ad-hNGFβ전염세포후소표체적활성산물이hNGFβ이취체적형식존재.류식세포의측득세포증식지수여대조조비명현승고,P<0.01.결론:Ad-hNGFβ가유효개도hNGFβ기인전염원대배양적척수성형효질세포,병차성공표체유활성적hNGFβ,증가세포활성.