CAJ | 학술논문

目的制备日本血吸虫复合B细胞表位抗原,并对其抗原性进行鉴定.方法用生物信息学软件(BioSun)预测已报告的日本血吸虫Sj22.6、Sj14-3-3、Sj26等3个B细胞表位片段的基因序列(P2、P6、P7),用随机顺序法连接3个片段,克隆入高效融合表达载体pET-32c(+)中,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,经酶切及基因测序鉴定重组子.阳性克隆经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱纯化,用蛋白质印迹(Western blotting)分析该表达产物的抗原性.结果 3个目的表位基因片段按P2-P6-P7和P6-P2-P7的顺序连接为2条复合表位片段(表位间由6个氨基酸组成的柔性接头连接),成功克隆入pET-32c(+).其重组子均可表达相对分子质量(Mr)约20 400的融合蛋白.亲和层析纯化的融合蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为单一条带(Mr20 400),Westernblotting分析显示,这2条重组复合表位蛋白均可被日本血吸虫病患者血清识别,而不与健康者血清反应.结论获得2个具有日本血吸虫病诊断潜在价值的复合B细胞表位抗原.
목적 제비일본혈흡충복합B세포표위항원,병대기항원성진행감정.방법 용생물신식학연건(BioSun)예측이보고적일본혈흡충Sj22.6、Sj14-3-3、Sj26등3개B세포표위편단적기인서렬(P2、P6、P7),용수궤순서법련접3개편단,극륭입고효융합표체재체pET-32c(+)중,전화대장애희균BL21감수태세포,경매절급기인측서감정중조자.양성극륭경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,표체산물용Ni2+오합주순화,용단백질인적(Western blotting)분석해표체산물적항원성.결과 3개목적 표위기인편단안P2-P6-P7화P6-P2-P7적순서련접위2조복합표위편단(표위간유6개안기산조성적유성접두련접),성공극륭입pET-32c(+).기중조자균가표체상대분자질량(Mr)약20 400적융합단백.친화층석순화적융합단백경십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)현시위단일조대(Mr20 400),Westernblotting분석현시,저2조중조복합표위단백균가피일본혈흡충병환자혈청식별,이불여건강자혈청반응.결론 획득2개구유일본혈흡충병진단잠재개치적복합B세포표위항원.