中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2007年
10期
1887-1890
,共4页
尚丹%郑启昌%宋自芳%汪谢丹%胡青钢%郭兴军
尚丹%鄭啟昌%宋自芳%汪謝丹%鬍青鋼%郭興軍
상단%정계창%송자방%왕사단%호청강%곽흥군
真核表达%Arresten%血管平滑肌细胞%细胞增殖%细胞运动
真覈錶達%Arresten%血管平滑肌細胞%細胞增殖%細胞運動
진핵표체%Arresten%혈관평활기세포%세포증식%세포운동
目的:真核表达人Arresten蛋白,并研究其对体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移的影响.方法:用脂质体介导,将含有人Arresten基因的重组质粒pSecTag2-AT转染COS-7细胞;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染细胞目的基因mRNA表达;收集转染48h后上清液,浓缩后Western blotting分析检测目的蛋白的表达.用转染细胞上清液处理平滑肌细胞后,CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室法检测细胞迁移.结果:RT-PCR结果显示转染Arresten基因的COS-7细胞基因组中存在有目的基因特异性片段(449 bp),表明基因转染成功;Western blotting结果表明转染细胞上清液中有目的蛋白表达.细胞体外增殖分析显示Arresten蛋白可显著抑制血管平滑肌细胞的增殖作用(F=40.154,P＜0.01);Transwell小室法检测显示经对照细胞,载体DNA转染及重组质粒转染的COS-7细胞培养上清液处理的平滑肌细胞迁移数为(28.70±3.97)个、(26.10±4.53)个、(14.00±3.33)个(F=38.915,P＜0.01).结论:真核表达的人Arresten蛋白能有效抑制体外培养的血管平滑肌细胞的增殖和迁移.
目的:真覈錶達人Arresten蛋白,併研究其對體外培養大鼠胸主動脈血管平滑肌細胞(VSMCs)增殖和遷移的影響.方法:用脂質體介導,將含有人Arresten基因的重組質粒pSecTag2-AT轉染COS-7細胞;應用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測轉染細胞目的基因mRNA錶達;收集轉染48h後上清液,濃縮後Western blotting分析檢測目的蛋白的錶達.用轉染細胞上清液處理平滑肌細胞後,CCK-8法檢測細胞增殖;Transwell小室法檢測細胞遷移.結果:RT-PCR結果顯示轉染Arresten基因的COS-7細胞基因組中存在有目的基因特異性片段(449 bp),錶明基因轉染成功;Western blotting結果錶明轉染細胞上清液中有目的蛋白錶達.細胞體外增殖分析顯示Arresten蛋白可顯著抑製血管平滑肌細胞的增殖作用(F=40.154,P＜0.01);Transwell小室法檢測顯示經對照細胞,載體DNA轉染及重組質粒轉染的COS-7細胞培養上清液處理的平滑肌細胞遷移數為(28.70±3.97)箇、(26.10±4.53)箇、(14.00±3.33)箇(F=38.915,P＜0.01).結論:真覈錶達的人Arresten蛋白能有效抑製體外培養的血管平滑肌細胞的增殖和遷移.
목적:진핵표체인Arresten단백,병연구기대체외배양대서흉주동맥혈관평활기세포(VSMCs)증식화천이적영향.방법:용지질체개도,장함유인Arresten기인적중조질립pSecTag2-AT전염COS-7세포;응용역전록-취합매련반응(RT-PCR)검측전염세포목적기인mRNA표체;수집전염48h후상청액,농축후Western blotting분석검측목적단백적표체.용전염세포상청액처리평활기세포후,CCK-8법검측세포증식;Transwell소실법검측세포천이.결과:RT-PCR결과현시전염Arresten기인적COS-7세포기인조중존재유목적기인특이성편단(449 bp),표명기인전염성공;Western blotting결과표명전염세포상청액중유목적단백표체.세포체외증식분석현시Arresten단백가현저억제혈관평활기세포적증식작용(F=40.154,P＜0.01);Transwell소실법검측현시경대조세포,재체DNA전염급중조질립전염적COS-7세포배양상청액처리적평활기세포천이수위(28.70±3.97)개、(26.10±4.53)개、(14.00±3.33)개(F=38.915,P＜0.01).결론:진핵표체적인Arresten단백능유효억제체외배양적혈관평활기세포적증식화천이.
