中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
9期
31-35
,共5页
窦敏%张国广%于广福%张红心%沈明山%陈亮
竇敏%張國廣%于廣福%張紅心%瀋明山%陳亮
두민%장국엄%우엄복%장홍심%침명산%진량
MS2噬菌体%外壳蛋白%RNA病毒%病毒样颗粒
MS2噬菌體%外殼蛋白%RNA病毒%病毒樣顆粒
MS2서균체%외각단백%RNA병독%병독양과립
利用PCR技术扩增大肠杆菌MS2噬菌体的外壳蛋白和成熟酶蛋白基因,将其克隆到pET32a中构建中间载体pET32a-CP.将口蹄疫病毒(FMDV)的内部核糖体结合位点(IRES)保守序列连接到中间载体噬菌体基因的下游,构建原核表达载体pCPES.将重组质粒pCPES转化宿主菌BL21(DE3),1 mmol/L IPTG诱导表达.蔗糖密度梯度离心纯化表达产物.透射电镜观察到直径大约26 nm的圆形病毒样颗粒.检测病毒样颗粒的稳定性并进行RT-PCR鉴定.结果表明该病毒样颗粒含口蹄疫病毒IRES RNA序列,并且稳定性良好,构建的病毒样颗粒可以作为RNA病毒检测时的标准品和质控品使用.
利用PCR技術擴增大腸桿菌MS2噬菌體的外殼蛋白和成熟酶蛋白基因,將其剋隆到pET32a中構建中間載體pET32a-CP.將口蹄疫病毒(FMDV)的內部覈糖體結閤位點(IRES)保守序列連接到中間載體噬菌體基因的下遊,構建原覈錶達載體pCPES.將重組質粒pCPES轉化宿主菌BL21(DE3),1 mmol/L IPTG誘導錶達.蔗糖密度梯度離心純化錶達產物.透射電鏡觀察到直徑大約26 nm的圓形病毒樣顆粒.檢測病毒樣顆粒的穩定性併進行RT-PCR鑒定.結果錶明該病毒樣顆粒含口蹄疫病毒IRES RNA序列,併且穩定性良好,構建的病毒樣顆粒可以作為RNA病毒檢測時的標準品和質控品使用.
이용PCR기술확증대장간균MS2서균체적외각단백화성숙매단백기인,장기극륭도pET32a중구건중간재체pET32a-CP.장구제역병독(FMDV)적내부핵당체결합위점(IRES)보수서렬련접도중간재체서균체기인적하유,구건원핵표체재체pCPES.장중조질립pCPES전화숙주균BL21(DE3),1 mmol/L IPTG유도표체.자당밀도제도리심순화표체산물.투사전경관찰도직경대약26 nm적원형병독양과립.검측병독양과립적은정성병진행RT-PCR감정.결과표명해병독양과립함구제역병독IRES RNA서렬,병차은정성량호,구건적병독양과립가이작위RNA병독검측시적표준품화질공품사용.
