生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2007年
1期
108-112
,共5页
李铁军%康楷%宋建宁%胡瓒斓%张秉强%张才全
李鐵軍%康楷%宋建寧%鬍瓚斕%張秉彊%張纔全
리철군%강해%송건저%호찬란%장병강%장재전
RNA干扰%Dicer%小发夹样RNA(shRNA)
RNA榦擾%Dicer%小髮夾樣RNA(shRNA)
RNA간우%Dicer%소발협양RNA(shRNA)
目的 通过RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子(WGF)表达,并观察在不同细胞系中,RNA干扰作用强度的变化.方法 将VEGF基因作为RNA干扰的靶区.通过E-RNAl网上提供的服务,设计两个特异的RNA干扰序列,将其装入含U6启动子的载体上,构建成抗VEGF基因的小发夹样RNA(sbRNA)表达载体,再转染人胚肾细胞HEK293、结肠癌细胞HT29、宫颈癌细胞Hela和肝癌细胞HepG2,通过RT-PCR观察VEGF表达受抑的程度及在不同细胞系中RNA干扰作用强度的变化.结果 成功构建了两种抗VEGF基因的shRNA表达栽体,发现其在HEK293和HT29细胞系中.能明显抑制VEGF基因的表迭,抑制率分别为72%和42%;但在Hela细胞中,抑制作用明显减低至28%;在HepG2细胞中抑制作用更弱.仅为13%.结论 针对VEGF基因的shRNA表达栽体能够明显抑制VEGF基因的表达,但在不同细胞系中的作用强度有明显差别,提示RNA干扰作用存在明显的细胞系选择性.
目的 通過RNA榦擾技術抑製血管內皮生長因子(WGF)錶達,併觀察在不同細胞繫中,RNA榦擾作用彊度的變化.方法 將VEGF基因作為RNA榦擾的靶區.通過E-RNAl網上提供的服務,設計兩箇特異的RNA榦擾序列,將其裝入含U6啟動子的載體上,構建成抗VEGF基因的小髮夾樣RNA(sbRNA)錶達載體,再轉染人胚腎細胞HEK293、結腸癌細胞HT29、宮頸癌細胞Hela和肝癌細胞HepG2,通過RT-PCR觀察VEGF錶達受抑的程度及在不同細胞繫中RNA榦擾作用彊度的變化.結果 成功構建瞭兩種抗VEGF基因的shRNA錶達栽體,髮現其在HEK293和HT29細胞繫中.能明顯抑製VEGF基因的錶迭,抑製率分彆為72%和42%;但在Hela細胞中,抑製作用明顯減低至28%;在HepG2細胞中抑製作用更弱.僅為13%.結論 針對VEGF基因的shRNA錶達栽體能夠明顯抑製VEGF基因的錶達,但在不同細胞繫中的作用彊度有明顯差彆,提示RNA榦擾作用存在明顯的細胞繫選擇性.
목적 통과RNA간우기술억제혈관내피생장인자(WGF)표체,병관찰재불동세포계중,RNA간우작용강도적변화.방법 장VEGF기인작위RNA간우적파구.통과E-RNAl망상제공적복무,설계량개특이적RNA간우서렬,장기장입함U6계동자적재체상,구건성항VEGF기인적소발협양RNA(sbRNA)표체재체,재전염인배신세포HEK293、결장암세포HT29、궁경암세포Hela화간암세포HepG2,통과RT-PCR관찰VEGF표체수억적정도급재불동세포계중RNA간우작용강도적변화.결과 성공구건료량충항VEGF기인적shRNA표체재체,발현기재HEK293화HT29세포계중.능명현억제VEGF기인적표질,억제솔분별위72%화42%;단재Hela세포중,억제작용명현감저지28%;재HepG2세포중억제작용경약.부위13%.결론 침대VEGF기인적shRNA표체재체능구명현억제VEGF기인적표체,단재불동세포계중적작용강도유명현차별,제시RNA간우작용존재명현적세포계선택성.
