生物医学工程学杂志
生物醫學工程學雜誌
생물의학공정학잡지
2007年
3期
659-663
,共5页
倪剑锋%纪剑飞%白向阳%吕安国%黄日波%韦宇拓%吴文芳
倪劍鋒%紀劍飛%白嚮暘%呂安國%黃日波%韋宇拓%吳文芳
예검봉%기검비%백향양%려안국%황일파%위우탁%오문방
单链抗体%单链双特异性抗体%表达
單鏈抗體%單鏈雙特異性抗體%錶達
단련항체%단련쌍특이성항체%표체
利用重叠PCR(overlap-PCR)将抗GD2表面抗原GD2的单链抗体基因m-ScFv和抗CD16的单链抗体基因NM3E2融合在一起,得到新型的单链双特异性抗体基因n-m,双抗的联接肽序列为SerGly4Ser, 在肽连的C端引入了6×his以利于纯化.该双特异性抗体基因的序列经测序验证后,连接表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),诱导表达,凝胶成像系统扫描显示表达的外源融合蛋白约占菌体总蛋白的27%.表达蛋白分泌于胞质空间,经超声波破胞后收集上清,经Ni+亲和层析柱分离,纯度可达90%以上.经SDS-PAGE及Western blotting鉴定表达蛋白的分子量为53KD,与预期的相符.
利用重疊PCR(overlap-PCR)將抗GD2錶麵抗原GD2的單鏈抗體基因m-ScFv和抗CD16的單鏈抗體基因NM3E2融閤在一起,得到新型的單鏈雙特異性抗體基因n-m,雙抗的聯接肽序列為SerGly4Ser, 在肽連的C耑引入瞭6×his以利于純化.該雙特異性抗體基因的序列經測序驗證後,連接錶達載體pET-22b(+),轉化大腸桿菌菌株BL21(DE3),誘導錶達,凝膠成像繫統掃描顯示錶達的外源融閤蛋白約佔菌體總蛋白的27%.錶達蛋白分泌于胞質空間,經超聲波破胞後收集上清,經Ni+親和層析柱分離,純度可達90%以上.經SDS-PAGE及Western blotting鑒定錶達蛋白的分子量為53KD,與預期的相符.
이용중첩PCR(overlap-PCR)장항GD2표면항원GD2적단련항체기인m-ScFv화항CD16적단련항체기인NM3E2융합재일기,득도신형적단련쌍특이성항체기인n-m,쌍항적련접태서렬위SerGly4Ser, 재태련적C단인입료6×his이리우순화.해쌍특이성항체기인적서렬경측서험증후,련접표체재체pET-22b(+),전화대장간균균주BL21(DE3),유도표체,응효성상계통소묘현시표체적외원융합단백약점균체총단백적27%.표체단백분비우포질공간,경초성파파포후수집상청,경Ni+친화층석주분리,순도가체90%이상.경SDS-PAGE급Western blotting감정표체단백적분자량위53KD,여예기적상부.
