生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
1期
73-78
,共6页
苏彩霞%顾美荣%张萍%金贞姬%孟凡红%陈尔佳%杨喆%刘勇%王佑春
囌綵霞%顧美榮%張萍%金貞姬%孟凡紅%陳爾佳%楊喆%劉勇%王祐春
소채하%고미영%장평%금정희%맹범홍%진이가%양철%류용%왕우춘
戊型肝炎病毒%ORF2基因%汉逊酵母%表达%56kD蛋白
戊型肝炎病毒%ORF2基因%漢遜酵母%錶達%56kD蛋白
무형간염병독%ORF2기인%한손효모%표체%56kD단백
为了寻求新型表达系统来研制戊型肝炎基因工程疫苗,利用甲基营养型汉逊酵母(Hansenula polymorpha)系统表达戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)Ⅳ型结构区ORF2编码蛋白第112-607氨基酸片段.为实现目的基因在汉逊酵母中的高效表达,根据汉逊酵母偏爱密码子优化设计目的基因,用搭桥PCR法合成优化后的基因序列,并克隆到多拷贝表达载体上,转化汉逊酵母营养缺陷宿主菌ATCC26012(Ura3-),在选择培养基上培养,运用PCR法筛选得到携带外源基因的重组菌株,然后用含甲醇的培养基诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE、ELISA和Western blot检测和鉴定.SDS-PAGE实验结果表明目的蛋白分子量约为56kD,表达量占菌体总蛋白的12%;ELISA检测结果表明表达产物为具有免疫反应性的HEV ORF2蛋白,ELISA效价最高可达1∶2048,目的蛋白表达量随着基因拷贝数的增加呈升高的趋势;Western blot鉴别实验结果证实表达产物与HEV多抗有特异性抗原抗体结合反应.HEV结构区ORF2蛋白在汉逊酵母中的成功表达,为研制基因工程戊型肝炎疫苗奠定了基础.
為瞭尋求新型錶達繫統來研製戊型肝炎基因工程疫苗,利用甲基營養型漢遜酵母(Hansenula polymorpha)繫統錶達戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)Ⅳ型結構區ORF2編碼蛋白第112-607氨基痠片段.為實現目的基因在漢遜酵母中的高效錶達,根據漢遜酵母偏愛密碼子優化設計目的基因,用搭橋PCR法閤成優化後的基因序列,併剋隆到多拷貝錶達載體上,轉化漢遜酵母營養缺陷宿主菌ATCC26012(Ura3-),在選擇培養基上培養,運用PCR法篩選得到攜帶外源基因的重組菌株,然後用含甲醇的培養基誘導錶達,對錶達產物進行SDS-PAGE、ELISA和Western blot檢測和鑒定.SDS-PAGE實驗結果錶明目的蛋白分子量約為56kD,錶達量佔菌體總蛋白的12%;ELISA檢測結果錶明錶達產物為具有免疫反應性的HEV ORF2蛋白,ELISA效價最高可達1∶2048,目的蛋白錶達量隨著基因拷貝數的增加呈升高的趨勢;Western blot鑒彆實驗結果證實錶達產物與HEV多抗有特異性抗原抗體結閤反應.HEV結構區ORF2蛋白在漢遜酵母中的成功錶達,為研製基因工程戊型肝炎疫苗奠定瞭基礎.
위료심구신형표체계통래연제무형간염기인공정역묘,이용갑기영양형한손효모(Hansenula polymorpha)계통표체무형간염병독(Hepatitis E virus,HEV)Ⅳ형결구구ORF2편마단백제112-607안기산편단.위실현목적기인재한손효모중적고효표체,근거한손효모편애밀마자우화설계목적기인,용탑교PCR법합성우화후적기인서렬,병극륭도다고패표체재체상,전화한손효모영양결함숙주균ATCC26012(Ura3-),재선택배양기상배양,운용PCR법사선득도휴대외원기인적중조균주,연후용함갑순적배양기유도표체,대표체산물진행SDS-PAGE、ELISA화Western blot검측화감정.SDS-PAGE실험결과표명목적단백분자량약위56kD,표체량점균체총단백적12%;ELISA검측결과표명표체산물위구유면역반응성적HEV ORF2단백,ELISA효개최고가체1∶2048,목적단백표체량수착기인고패수적증가정승고적추세;Western blot감별실험결과증실표체산물여HEV다항유특이성항원항체결합반응.HEV결구구ORF2단백재한손효모중적성공표체,위연제기인공정무형간염역묘전정료기출.
