CAJ | 학술논문

目的建立稳定、高效表达重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)的工程菌发酵及表达产物纯化工艺.方法规模化发酵表达rEPA的重组大肠杆菌rPE553D,离心收集菌体,渗透压调解使菌体周质间隙蛋白释放后,高速离心收集蛋白溶液.经DEAE Sepharose FF、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析和SOURCE 30Q强离子交换层析,超滤浓缩纯化rEPA.用HPLC、SDS-PAGE和Western blot等方法检定生化和免疫学特性,并用小鼠和Vero细胞检定毒性.结果每55 L培养基中rEPA产量超过4 g,纯度在95%以上,细胞毒性降低了至少32 000倍.其余各项指标均符合<中国生物制品规程>要求.结论已建立了收率高、纯度好、稳定、适合规模化生产rEPA的工艺.
목적건립은정、고효표체중조동록가단포균외독소A(rEPA)적공정균발효급표체산물순화공예.방법규모화발효표체rEPA적중조대장간균rPE553D,리심수집균체,삼투압조해사균체주질간극단백석방후,고속리심수집단백용액.경DEAE Sepharose FF、Phenyl Sepharose 6FF소수층석화SOURCE 30Q강리자교환층석,초려농축순화rEPA.용HPLC、SDS-PAGE화Western blot등방법검정생화화면역학특성,병용소서화Vero세포검정독성.결과매55 L배양기중rEPA산량초과4 g,순도재95%이상,세포독성강저료지소32 000배.기여각항지표균부합<중국생물제품규정>요구.결론이건립료수솔고、순도호、은정、괄합규모화생산rEPA적공예.