复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2006年
2期
229-232
,共4页
谭理%李平%童畅%朱运松
譚理%李平%童暢%硃運鬆
담리%리평%동창%주운송
T细胞内抗原相关蛋白%细胞内定位%增强型绿色荧光蛋白
T細胞內抗原相關蛋白%細胞內定位%增彊型綠色熒光蛋白
T세포내항원상관단백%세포내정위%증강형록색형광단백
目的阐明核糖核酸(RNA)结合蛋白T细胞内抗原相关蛋白(TIAR)的结构域与细胞内定位之间的关系.方法细胞免疫荧光检测SMCC-7721细胞内源性TIAR的细胞内分布,亚克隆构建TIAR全长及缺失体的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达质粒,脂质体法瞬时转染SMCC-7721细胞,在荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞内的荧光分布情况,免疫印迹检测融合蛋白的表达情况.结果细胞免疫荧光结果显示在SMCC-7721细胞中TIAR主要浓集于细胞核,细胞浆也有少量弥散分布.酶切鉴定及测序结果显示TIAR全长及缺失体的pEGFP-C3重组表达质粒构建成功.EGFP-TIARFL(TIAR全长)主要分布于细胞核;而EGFP-TIARRRM123(TIAR的N端3个RNA结合结构域)弥散分布于整个细胞;EGFP-TIARQ-rich(TIAR的C端谷胺酰胺富含结构域)浓集于细胞核,但浓集程度要比TIARFL-EGFP弱.免疫印迹证实过表达的TIAR全长及缺失体的EGFP融合蛋白分子量大小符合预期.结论我们的结果提示C端谷氨酸富含结构域参与TIAR细胞内定位的调节.
目的闡明覈糖覈痠(RNA)結閤蛋白T細胞內抗原相關蛋白(TIAR)的結構域與細胞內定位之間的關繫.方法細胞免疫熒光檢測SMCC-7721細胞內源性TIAR的細胞內分佈,亞剋隆構建TIAR全長及缺失體的增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)錶達質粒,脂質體法瞬時轉染SMCC-7721細胞,在熒光顯微鏡下觀察融閤蛋白在細胞內的熒光分佈情況,免疫印跡檢測融閤蛋白的錶達情況.結果細胞免疫熒光結果顯示在SMCC-7721細胞中TIAR主要濃集于細胞覈,細胞漿也有少量瀰散分佈.酶切鑒定及測序結果顯示TIAR全長及缺失體的pEGFP-C3重組錶達質粒構建成功.EGFP-TIARFL(TIAR全長)主要分佈于細胞覈;而EGFP-TIARRRM123(TIAR的N耑3箇RNA結閤結構域)瀰散分佈于整箇細胞;EGFP-TIARQ-rich(TIAR的C耑穀胺酰胺富含結構域)濃集于細胞覈,但濃集程度要比TIARFL-EGFP弱.免疫印跡證實過錶達的TIAR全長及缺失體的EGFP融閤蛋白分子量大小符閤預期.結論我們的結果提示C耑穀氨痠富含結構域參與TIAR細胞內定位的調節.
목적천명핵당핵산(RNA)결합단백T세포내항원상관단백(TIAR)적결구역여세포내정위지간적관계.방법세포면역형광검측SMCC-7721세포내원성TIAR적세포내분포,아극륭구건TIAR전장급결실체적증강형록색형광단백(EGFP)표체질립,지질체법순시전염SMCC-7721세포,재형광현미경하관찰융합단백재세포내적형광분포정황,면역인적검측융합단백적표체정황.결과세포면역형광결과현시재SMCC-7721세포중TIAR주요농집우세포핵,세포장야유소량미산분포.매절감정급측서결과현시TIAR전장급결실체적pEGFP-C3중조표체질립구건성공.EGFP-TIARFL(TIAR전장)주요분포우세포핵;이EGFP-TIARRRM123(TIAR적N단3개RNA결합결구역)미산분포우정개세포;EGFP-TIARQ-rich(TIAR적C단곡알선알부함결구역)농집우세포핵,단농집정도요비TIARFL-EGFP약.면역인적증실과표체적TIAR전장급결실체적EGFP융합단백분자량대소부합예기.결론아문적결과제시C단곡안산부함결구역삼여TIAR세포내정위적조절.
