CAJ | 학술논문

本研究拟改造间接免疫荧光技术(IIF)抗核抗体(ANA)检测法的底物HEp-2细胞,建立抗60kDRo60/SSA抗体免疫荧光检测法.采用PCR扩增人源Ro60 cDNA,克隆入真核表达载体pEGFP-C1,并转染HEp-2细胞.通过荧光显微镜、免疫印迹法(IBT)及IIF鉴定转染细胞(HEp-Ro60)中Ro60-绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的表达和抗原性.分别以HEp-Ro60以及HEp-2为底物的IIF检测10份抗Ro/SSA对流免疫电泳(CIE)检测阳性、其他抗体阴性血清以及对照血清.获得的转染细胞传十几代后仍具有较强的Ro60-GFP表达,融合蛋白保持Ro60的抗原性.IIF检测中HEp-Ro60的滴度比HEp-2增加了6.7倍(P＜0.01),而且2例HEp-2细胞上IIF检测为阴性的血清在HEp-Ro60上为阳性.10例阳性血清中有8例出现了特征性荧光模式.结论是HEp-Ro60可用于IIF检测抗Ro抗体,并增加了ANA检出的敏感性.
본연구의개조간접면역형광기술(IIF)항핵항체(ANA)검측법적저물HEp-2세포,건립항60kDRo60/SSA항체면역형광검측법.채용PCR확증인원Ro60 cDNA,극륭입진핵표체재체pEGFP-C1,병전염HEp-2세포.통과형광현미경、면역인적법(IBT)급IIF감정전염세포(HEp-Ro60)중Ro60-록색형광단백(GFP)융합단백적표체화항원성.분별이HEp-Ro60이급HEp-2위저물적IIF검측10빈항Ro/SSA대류면역전영(CIE)검측양성、기타항체음성혈청이급대조혈청.획득적전염세포전십궤대후잉구유교강적Ro60-GFP표체,융합단백보지Ro60적항원성.IIF검측중HEp-Ro60적적도비HEp-2증가료6.7배(P＜0.01),이차2례HEp-2세포상IIF검측위음성적혈청재HEp-Ro60상위양성.10례양성혈청중유8례출현료특정성형광모식.결론시HEp-Ro60가용우IIF검측항Ro항체,병증가료ANA검출적민감성.