中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2005年
6期
457-460
,共4页
陈勇%蒋琳%杨军%李萍%梁凌宇%沈心亮%谢云飞
陳勇%蔣琳%楊軍%李萍%樑凌宇%瀋心亮%謝雲飛
진용%장림%양군%리평%량릉우%침심량%사운비
人神经生长因子%基因表达%CHO细胞%二氢叶酸还原酶
人神經生長因子%基因錶達%CHO細胞%二氫葉痠還原酶
인신경생장인자%기인표체%CHO세포%이경협산환원매
目的在CHO细胞中共表达二氢叶酸还原酶(DHFR)基因及人神经生长因子β亚基(β-hNGF)基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析.方法克隆DHFR和β-hNGF基因,测序,酶切,连接到真核表达载体pBudCE4.1中,构建人NGF基因重组表达质粒pBudCE4.1/DHFR/β-hNGF,经电转染法导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-DHFR-)中,经添加Zeocin抗生素和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)双筛选,获得了DHFR+细胞克隆.经MTX加压筛选高表达β-hNGF的CHO细胞株.SDS-PAGE、ELISA和Western blot对表达产物进行鉴定,并利用鸡胚背根神经节法检测表达蛋白的生物活性.结果人神经生长因子在CHO细胞中得到较高表达,表达量达0.3μg/ml,且表达产物具有良好的生物活性.结论为大规模工业化生产重组人神经生长因子奠定了基础.
目的在CHO細胞中共錶達二氫葉痠還原酶(DHFR)基因及人神經生長因子β亞基(β-hNGF)基因,併對錶達產物進行鑒定和生物活性分析.方法剋隆DHFR和β-hNGF基因,測序,酶切,連接到真覈錶達載體pBudCE4.1中,構建人NGF基因重組錶達質粒pBudCE4.1/DHFR/β-hNGF,經電轉染法導入二氫葉痠還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞(CHO-DHFR-)中,經添加Zeocin抗生素和撤除H、T(次黃嘌呤、胸腺嘧啶脫氧覈苷)雙篩選,穫得瞭DHFR+細胞剋隆.經MTX加壓篩選高錶達β-hNGF的CHO細胞株.SDS-PAGE、ELISA和Western blot對錶達產物進行鑒定,併利用鷄胚揹根神經節法檢測錶達蛋白的生物活性.結果人神經生長因子在CHO細胞中得到較高錶達,錶達量達0.3μg/ml,且錶達產物具有良好的生物活性.結論為大規模工業化生產重組人神經生長因子奠定瞭基礎.
목적재CHO세포중공표체이경협산환원매(DHFR)기인급인신경생장인자β아기(β-hNGF)기인,병대표체산물진행감정화생물활성분석.방법극륭DHFR화β-hNGF기인,측서,매절,련접도진핵표체재체pBudCE4.1중,구건인NGF기인중조표체질립pBudCE4.1/DHFR/β-hNGF,경전전염법도입이경협산환원매결함형중국창서란소세포(CHO-DHFR-)중,경첨가Zeocin항생소화철제H、T(차황표령、흉선밀정탈양핵감)쌍사선,획득료DHFR+세포극륭.경MTX가압사선고표체β-hNGF적CHO세포주.SDS-PAGE、ELISA화Western blot대표체산물진행감정,병이용계배배근신경절법검측표체단백적생물활성.결과인신경생장인자재CHO세포중득도교고표체,표체량체0.3μg/ml,차표체산물구유량호적생물활성.결론위대규모공업화생산중조인신경생장인자전정료기출.
