CAJ | 학술논문

目的原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ42)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术.方法化学合成Aβ42基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ42基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ42融合蛋白.Western blotting检测其抗原特异性.以GST-Aβ42和Aβ42肽分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42免疫的大鼠血清中Aβ抗体.结果原核表达的可溶性GST-Aβ42融合蛋白相对分子质量为31 000,经亲和纯化后,融合蛋白产量为800 mg/L菌液,纯度大于95%;Westem blotting证实纯化的融合抗原与Aβ单抗特异反应;以GST-Aβ42为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ抗体灵敏度为2 ng/ml;以GST-Aβ42和化学合成的Aβ42分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42肽免疫大鼠血清中Aβ抗体滴度,两者比较差异无显著性(P＞0.05).结论原核表达的GST-Aβ42融合蛋白可替代昂贵的化学合成的Aβ42肽抗原,用于检测Aβ抗体.
목적원핵표체β-정분양단백(Aβ42)항원,건립검측Aβ항체적간접ELISA기술.방법화학합성Aβ42기인량개호보편단,통과PCR구건인Aβ42기인,극륭지pGEX-2T표체재체중,원핵표체병친화순화GST-Aβ42융합단백.Western blotting검측기항원특이성.이GST-Aβ42화Aβ42태분별위포피항원,간접ELISA법검측Aβ42면역적대서혈청중Aβ항체.결과원핵표체적가용성GST-Aβ42융합단백상대분자질량위31 000,경친화순화후,융합단백산량위800 mg/L균액,순도대우95%;Westem blotting증실순화적융합항원여Aβ단항특이반응;이GST-Aβ42위포피항원,간접ELISA법검측Aβ항체령민도위2 ng/ml;이GST-Aβ42화화학합성적Aβ42분별위포피항원,간접ELISA법검측Aβ42태면역대서혈청중Aβ항체적도,량자비교차이무현저성(P＞0.05).결론원핵표체적GST-Aβ42융합단백가체대앙귀적화학합성적Aβ42태항원,용우검측Aβ항체.