第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2003年
9期
809-812
,共4页
赵强子%刘彦仿%窦科峰%张静%李开宗
趙彊子%劉彥倣%竇科峰%張靜%李開宗
조강자%류언방%두과봉%장정%리개종
PE38%免疫毒素%癌,肝细胞%表达%纯化
PE38%免疫毒素%癌,肝細胞%錶達%純化
PE38%면역독소%암,간세포%표체%순화
目的: 构建绿脓杆菌外毒素PE38融合人源化鼠抗肝癌单链抗体(hscFv)原核表达载体,并对其产物作初步纯化,检测其对人肝癌细胞系SMMC 7721的毒性作用. 方法: 采用基因工程原理,将PE38基因片段亚克隆入hscFv表达载体pGEX-4T-1中,重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确;转化大肠杆菌JM109后,受IPTG诱导表达GST融合蛋白,产物包涵体经变性、复性及重折叠并经 GST 亲合层析柱层析、凝血酶消化后,得到纯化的hscFv-PE38融合蛋白.采用 MTT 法检测hscFv-PE38对SMMC 7721的杀伤作用. 结果: 实验成功构建了免疫毒素表达载体pGEX-4T-1-hscFv-PE38(以下简称pGEXh-PE38);诱导产物主要以包涵体形式存在,表达量为11%; 纯化的hscFv-PE38对SMMC 7721细胞系具有较明显的杀伤作用,最大杀伤率为78%,IC50为0.386 mg*L-1. 结论: 人源化抗肝癌单链抗体与PE38重组免疫毒素的成功表达纯化及对人肝癌细胞系的试验结果,为进一步肝癌的导向治疗提供依据.
目的: 構建綠膿桿菌外毒素PE38融閤人源化鼠抗肝癌單鏈抗體(hscFv)原覈錶達載體,併對其產物作初步純化,檢測其對人肝癌細胞繫SMMC 7721的毒性作用. 方法: 採用基因工程原理,將PE38基因片段亞剋隆入hscFv錶達載體pGEX-4T-1中,重組剋隆載體經酶切及DNA序列測定證實兩片段連接正確;轉化大腸桿菌JM109後,受IPTG誘導錶達GST融閤蛋白,產物包涵體經變性、複性及重摺疊併經 GST 親閤層析柱層析、凝血酶消化後,得到純化的hscFv-PE38融閤蛋白.採用 MTT 法檢測hscFv-PE38對SMMC 7721的殺傷作用. 結果: 實驗成功構建瞭免疫毒素錶達載體pGEX-4T-1-hscFv-PE38(以下簡稱pGEXh-PE38);誘導產物主要以包涵體形式存在,錶達量為11%; 純化的hscFv-PE38對SMMC 7721細胞繫具有較明顯的殺傷作用,最大殺傷率為78%,IC50為0.386 mg*L-1. 結論: 人源化抗肝癌單鏈抗體與PE38重組免疫毒素的成功錶達純化及對人肝癌細胞繫的試驗結果,為進一步肝癌的導嚮治療提供依據.
목적: 구건록농간균외독소PE38융합인원화서항간암단련항체(hscFv)원핵표체재체,병대기산물작초보순화,검측기대인간암세포계SMMC 7721적독성작용. 방법: 채용기인공정원리,장PE38기인편단아극륭입hscFv표체재체pGEX-4T-1중,중조극륭재체경매절급DNA서렬측정증실량편단련접정학;전화대장간균JM109후,수IPTG유도표체GST융합단백,산물포함체경변성、복성급중절첩병경 GST 친합층석주층석、응혈매소화후,득도순화적hscFv-PE38융합단백.채용 MTT 법검측hscFv-PE38대SMMC 7721적살상작용. 결과: 실험성공구건료면역독소표체재체pGEX-4T-1-hscFv-PE38(이하간칭pGEXh-PE38);유도산물주요이포함체형식존재,표체량위11%; 순화적hscFv-PE38대SMMC 7721세포계구유교명현적살상작용,최대살상솔위78%,IC50위0.386 mg*L-1. 결론: 인원화항간암단련항체여PE38중조면역독소적성공표체순화급대인간암세포계적시험결과,위진일보간암적도향치료제공의거.