生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2002年
1期
42-44
,共3页
张宝%马文丽%刘莉扬%宋艳斌%郑文岭
張寶%馬文麗%劉莉颺%宋豔斌%鄭文嶺
장보%마문려%류리양%송염빈%정문령
银染色法%RD-PCR
銀染色法%RD-PCR
은염색법%RD-PCR
从正常培养的SH-SY5Y细胞中提取总RNA,经oligo(dT)纤维素柱纯化分离出mRNA,然后以oligo(dT18)为锚定引物反转录生成单链cDNA再以此为模板合成DNA的第二条链;将双链DNA经Sau3AI酶切之后,接上接头,经通用引物和选择性引物进行扩增;采用5%非变性PAGE胶电泳分离后,用银染的方法显示DNA条带;在直视下回收DNA带,经过扩增后克隆入pMDl8-T载体中并鉴定.结果建立了非放射性同位素的银染RD-PCR方法,用于分离基因片段.
從正常培養的SH-SY5Y細胞中提取總RNA,經oligo(dT)纖維素柱純化分離齣mRNA,然後以oligo(dT18)為錨定引物反轉錄生成單鏈cDNA再以此為模闆閤成DNA的第二條鏈;將雙鏈DNA經Sau3AI酶切之後,接上接頭,經通用引物和選擇性引物進行擴增;採用5%非變性PAGE膠電泳分離後,用銀染的方法顯示DNA條帶;在直視下迴收DNA帶,經過擴增後剋隆入pMDl8-T載體中併鑒定.結果建立瞭非放射性同位素的銀染RD-PCR方法,用于分離基因片段.
종정상배양적SH-SY5Y세포중제취총RNA,경oligo(dT)섬유소주순화분리출mRNA,연후이oligo(dT18)위묘정인물반전록생성단련cDNA재이차위모판합성DNA적제이조련;장쌍련DNA경Sau3AI매절지후,접상접두,경통용인물화선택성인물진행확증;채용5%비변성PAGE효전영분리후,용은염적방법현시DNA조대;재직시하회수DNA대,경과확증후극륭입pMDl8-T재체중병감정.결과건립료비방사성동위소적은염RD-PCR방법,용우분리기인편단.
